蛋白质的研究方法.pptVIP

主要内容 蛋白质对象的选择和样品的获取 蛋白质的检测和鉴定 蛋白质的结构分析 蛋白质生物功能检测 蛋白质对象的选择和样品的获取 直接从生物组织中提纯蛋白—— 蛋白质的分离纯化包括以下过程： 1.破碎生物组织，并用适当的缓冲液将蛋白质抽提出来； 2.将有关的蛋白质分级沉淀下来; （盐析法或有机溶剂法） 3.应用层析法或电泳法使它们各自分开； 4.蛋白质结晶； 5.蛋白质纯度鉴定和含量测定。 根据基因组测序获得的信息 （1）可以获得所要研究的特定蛋白质的AA序列。 先根据推出的AA序列合成对象蛋白中的一段肽，用它去获 得有关的抗体，然后用抗体去探测蛋白质的存在，甚至可以用抗体通过亲和层析纯化对象蛋白 （2）去获得有关基因的cDNA全序列，然后通过重组DNA技术去表达重组蛋白。 有偏差，甚至完全是假象。 即使推测得到的蛋白质编码信息是对的，在细胞内还存在转录后的RNA加工，翻译后的蛋白质的修饰和加工等基因序列上目前还无法反映的信息。 3.交替冻融法： 生物组织经冻结后，细胞内液结冰膨胀 而使细胞胀破。 4.超声波法： 利用超声波震荡，使细胞膜上所受张力不均而解体。 5.酶消化法： 利用蛋白酶、溶菌酶、蜗牛复合酶等对 　细胞膜或细胞壁的分解作用，使它们解体 三、去污剂处理溶解膜蛋白 膜蛋白的提取与细胞质蛋