鸡胸软骨硫酸软骨素的提取及分离纯化.pdfVIP

第25卷第1期 农业工程学报 、，01．25NO．1 oftheCSAE 2009年1月 Transactions Jan．2009271 鸡胸软骨硫酸软骨素的提取及分离纯化 熊双丽，李安林，吴照民，魏明 (西南科技大学生命科学与工程学院， 绵阳621010) 摘要：为优化硫酸软骨素的提取工艺和初步分析其结构，采用中心组合设计和响应面分析优化鸡胸软骨硫酸软骨素的 酶法提取工艺，三氯乙酸除蛋白质、乙醇沉淀以及柱色谱精细纯化得到商纯度硫酸软骨素，并采用高效凝胶过滤色谱判 定其纯度，红外光谱和核磁共振初步分析其结构。结果表明，硫酸软骨素的最佳提取工艺参数为温度55．68C，pH值为 6．40，时问为3．85h，葡萄糖醛酸和硫酸软骨素提取率分别达到9．82％和28．05％。高效凝胶过滤色谱分析其纯度为99．01％。 红外光谱和核磁共振显示硫酸软骨素卡要是4硫酸化软骨素。 关键词：提取，纯化，分离，鸡胸软骨，硫酸软骨素，分离纯化 中图分类号：TS06 文献标识码：A 文章编号：1002-6819(2009)一卜0271—05 Anlin，WuZhaomin，et and ofchondroitinsulfatefromchickenkeel XiongShuangli，Li a1．Extraction，separationpurification 1．1．2试剂 0引 言 木瓜蛋白酶，生化纯；硫酸软骨素A，葡萄糖醛酸 畜禽软骨，如猪喉软骨、牛鼻软骨和鸡胸软骨等， 标准品，乙酰氨基葡萄糖标准品、问羟基联苯(Sigma 是动物产晶来源的主要副产物之一，它们富含硫酸软骨 公司)；732”阳离子交换树脂(天津市科密欧化学试剂有 素(Chondroitmsulfate，ChS)、糖蛋白和胶原蛋白。其中 ChS主要由D．葡萄糖醛酸(GlcA)和N．乙酰一D一氨基半等皆为分析纯。 乳糖构成。根据硫酸基在葡萄糖醛酸和半乳糖上的位置 1．1．3仪器 和多少的不同，将其分为4硫酸软骨素(CMS，硫酸基 2410 在氨基半乳糖的第4位C上)和6硫酸软骨素(Ch6S，RefractiveIndex 硫酸基在氨基半乳糖的第6位C上)，以及硫酸软骨素E 7200分 (Ch4，6S，硫酸基在氨基半乳糖的第4位和6位C上)光光度计(上海尼龙柯仪器有限公司)；DPX400Bruker 等。它具有抗炎、抗癌、降血脂和抗粥样斑块形成等药 核磁共振仪(德国布鲁克公司)。 理作用，已应用于医药、功能性食品、生物材料，以及 1．2方法 化妆品原料等领域[1-3]。而且，其生物活性随结构变化而1．2．1软骨营养成分分析 变化【4】。但是，目前ChS生产工艺简单，主要用碱提取， 灰分、粗蛋白、粗脂肪测定，参照文献[7】进行测定。 产率低，并且污染严重【5’6l，特别是对鸡胸软骨硫酸软骨 1．2．2硫酸软骨素的测定 素的结构及功能之间的关系研究尚不多，本文主要采用 硫酸软骨素中丰要包含葡萄糖醛酸(GlcA)、氨基 己糖和硫酸根，葡萄糖醛酸的含量能间接反映硫酸软骨 酶法提取，运用中心组合设计和响应曲面法(response surface methodology)优化酶解工艺参数，以提高产率，素含龟，而且测定方法简单，可以大规模进行筛选试验Is]， 并进行纯化和初步结构分析，为其构效关系研究和软骨