胚胎后肾间充质细胞肾包膜下移植对急性肾小管坏死保护作用.pdfVIP

胚胎后肾间充质细胞肾包膜下移植对急性肾小管坏死 的保护作用1 陈丹，易著文，刘喜红，吴小川，党西强，莫双红 中南大学湘雅二医院小儿肾脏病研究室，湖南省小儿肾脏病临床中心，长沙 （410011 ） E-mail ：@ 摘 要：目的 将体外培养的胚胎后肾间充质细胞移植到大鼠右肾包膜下，探讨移植细胞对 宿主急性肾小管坏死的保护作用。方法 RIMM-18 细胞体外培养及扩增用于移植，SD 大鼠 分为五组，除正常对照组外其他四组均庆大霉素200mg/(kg.d)连续4 天皮下注射诱导建立肾 毒性肾小管坏死模型。首剂庆大霉素注射后第5、8、11、14 天每组分别取6 只大鼠处死， 留取血和肾组织标本,检测以下指标:①DAPI 示踪；②Scr 和尿NAG 酶；③肾组织病理评分； ④肾小管上皮细胞Ki-67 的表达,计算增殖指数。⑤肾小管上皮细胞的凋亡,计算凋亡指数； ⑥肾小管凋亡相关因子Bcl-2 蛋白表达。结果 （1 ）成功体外培养及扩增RIMM-18 细胞系。 （2 ）细胞移植组大鼠：①死亡率明显降低；②肾功能指标改善；③右肾皮质病理积分降低； ④右肾肾小管上皮细胞增殖明显；⑤右肾肾小管上皮细胞凋亡减少；⑥右肾Bcl-2 蛋白表达 水平增强。 结论 肾包膜下移植胚胎后肾间充质细胞能够修复损伤的肾脏，改善肾功能。 关键词：急性肾小管坏死，RIMM-18 细胞，病理，增生，凋亡 中图分类号：R620 对成体肾脏损伤后自身修复机制的研究发现[1, 2, 3, 4]，ATN 时小管细胞大量坏死、凋亡、 基底膜断裂，近曲小管细胞可以从成熟的上皮细胞去分化为胚胎/ 间充质性质的细胞。这种 去分化的细胞能够迁移至损伤部位，再分化为成熟的上皮细胞，修复损伤的肾组织[5]，该过 程类似于胚肾发育中的后肾间充质细胞向上皮细胞转分化的过程。显然，在急性损伤期仅仅 [6] [7, 8] 依赖本身的细胞转分化是不够的 。Oliver等研究 证实单独的后肾间充质细胞可生成除集 合管以外的所有肾上皮细胞，它是一种在合适的环境下能够定向分化为肾单位上皮细胞的肾 脏干细胞，在ARF 时能够促进肾脏的再生修复[9] 。目前已证实胚胎后肾中的肾脏干细胞在早 期（大鼠胚龄＜13.5天）免疫原性差[10] ，同种系移植在不使用免疫抑制剂的情况下可以分 化发育[11]，因此，本实验采用起源于F344大鼠的RIMM-18细胞移植到SD大鼠体内，希望通 过外源性的补充足够多的这种细胞来替代、修复或改善受损的小管，初步探讨这种治疗的可 行性。 1．材料与方法 1.1 移植细胞和实验动物 RIMM-18 细胞由美国马里兰州弗雷德里克国家健康研究所Levashova 博士惠赠。SPF 级8～ 10 周龄雌性 SD 大鼠，由中南大学湘雅二医院实验动物中心提供,实验动物许可证号 SYXK(湘)2004 －0013 。 1.2 实验方法 1.2.1 细胞培养及鉴定 RIMM-18 细胞复苏后，加入DMEM/F12 培养基5mL，1000 转/分离心5 分钟，弃上清液， 再加培养基5mL，吹打成单细胞悬液，移入塑料培养瓶，放入5 %CO2 培养箱中孵育，2～3 1本课题得到国家自然科学基金（项目号；教育部博士点基金资助 项目号：20040533043 ）资助。 - 1 - 天换 5 个/孔细胞浓 液一次，取生长良好的细胞，用0.25%胰酶/0.02%EDTA(1:1)消化后，以1×10 度接种到备有高压灭菌及多聚赖氨酸处理的盖玻片的 6 孔板中，待细胞爬片 80%后取出， 按SABC 试剂盒说明书进行波形蛋白和角蛋白的免疫细胞化学染色。 1.2.2 动物实验分组 SD 大鼠分为5 组：①正常对照组（control ）：不做任何处理；②急性肾小管坏死组