vegf在人大肠癌组织的意义.docxVIP

血管内皮生长因子及其受体在人大肠癌组织中的分布、定量和意义 陈??治1???王晓莉2???张??莉2???黄宗海1???潘玉先1???曹长安1 1中国人民解放军第一军医大学珠江医院普通外科??广东省广州市??5102822华西医科大学附二院妇产科??四川省成都市项目负责人??陈治中国人民解放军第一军医大学珠江医院普通外科??广东省广州市??510282收稿日期??2000-01-14??接收日期??2000-01-20? Subject headings??intestinal neoplasms; endothelium; vascular; immunohistochemistry; vascular endothelial growth factor; vascular endothelial growth factor receptor; toumor vascular targeting therapy 主题词??肠肿瘤；内皮；血管；免疫组织化学反应；血管内皮生长因子；血管内皮生长因子受体；肿瘤血管靶向治疗 陈治,王晓莉,张莉,黄宗海,潘玉先,曹长安.?血管内皮生长因子及其受体在人大肠癌组织中的分布、定量和意义.?世界华人消化杂志，2000；8(4)：472-473??? 肿瘤的生长和转移与肿瘤区的血管密切相关. 1971年Folkman首先提出抑制肿瘤血管形成可作为肿瘤治疗的一个途径，随后这种以肿瘤血管为靶的治疗策略——肿瘤血管靶向治疗(toumor vascular targeting therapy)日益受到重视.?血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)是最重要的血管形成因子之一，VEGF及其受体(VEGFR)是肿瘤血管靶向治疗的理想靶点.?以VEGF为靶点的治疗实验已有大量报道［1-3］，以VEGFR为靶点近期亦有较成功的尝试［4，5］，本实验旨在观察和比较大肠癌组织中VEGF及其受体KDR的表达差异，为确定以VEGF及VEGFR作为肿瘤血管靶向治疗的靶点何者为优提供依据. 1??材料和方法 1.1??材料??大肠癌组织标本80例来自珠江医院普通外科1992/1998年住院手术患者，年龄38岁～78岁(平均58.7岁)，男58例，女22例，所有患者术前均未接受化疗、放疗或其他针对肿瘤的治疗.?标本按组织学Broder法分型分为四型：高分化腺癌、中分化腺癌、低分化腺癌和粘液腺癌.?正常大肠组织标本10例进行对照.?所有标本均用100g/L甲醛固定24h，常规石蜡包埋，制备5μm厚的连续切片，贴附于涂有多聚赖氨酸的载玻片上.?主要试剂：小鼠抗人VEGF单克隆抗体(IgGl)购自美国Neuwork公司，小鼠抗人KDR单克隆抗体(IgGl)购自美国Sigma公司，DAB显色试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司. 1.2??方法??①邻片免疫组织化学双标记法：免疫组化染色采用SABC法，第一抗体为鼠抗人VEGF单克隆抗体和鼠抗人KDR单克隆抗体(工作浓度均为1∶100)，正常鼠IgG作为阴性对照，PBS替代第一抗体作为空白对照，正常大肠组织切片作为正常对照.?于每个标本的连续切片中选取相邻切片，分别以鼠抗VEGF抗体和鼠抗KDR抗体按SABC法进行邻片双标记研究，VEGF阳性染色以见到定位于肿瘤细胞胞质或胞膜的棕色染色为准，KDR阳性染色以见到定位于血管内皮细胞膜的棕色染色为准.?②图象分析法定量：鉴于大肠癌组织学切片中细胞间的分界线往往不明确，采用Macintosh?Ⅱ图象分析系统(Adob photoshop 5.0)按文献［6］提供的方法(公式11)计算待测切片上阳性反应程度的阳性单位(PU)，得到免疫组化显色反应的量化结果.??????统计学处理??PU值以x±s表示，邻片间VEGF与KDR的表达量比较采用配对资料的t检验.?以上统计分析均在Spess 8.0统计分析软件中进行. 2??结果 2.1??免疫组化染色结果??①正常大肠组织及空白对照切片中均未见免疫反应阳性信号.?在癌组织中，VEGF阳性物质主要位于癌细胞的胞膜和(或)胞质，血管内皮细胞上未见VEGF染色；KDR阳性物质主要位于癌组织的血管内皮细胞上，且新生血管内皮细胞的着色明显强于较大血管内皮细胞.?部分无血管区域的癌细胞上也有弱的KDR染色.?②VEGF和KDR的染色程度与肿瘤区域及病理分型有关，癌组织边缘区细胞的染色要强于中心区，按病理分型恶性程度高者较恶性程度低者染色程度为强，③对比两张邻片，VEGF的阳性反应强度要明显强于KDR. 2.2??图象分析法定量结果??80例大肠癌中，VEGF的阳性反应定量