模块5-项目4核酸药物发酵技术.pptVIP

模块二 微生物药物发酵生产流程 模块二 微生物药物发酵生产流程 1. 种子的扩大培养 核苷类药物 3.直接发酵法 直接发酵法是根据产生菌的特点，采用营养缺陷型菌株或营养缺陷型兼结构类似物抗性菌株，通过控制适当的发酵条件，打破菌体对核酸类物质的代谢调节控制，使之发酵生产大量的某一种核苷或核苷酸。例如用产氨短杆菌腺嘌呤缺陷型突变株直接发酵生产肌苷酸。 pH7 接种量0.9% (32±1)℃ 温度通气量为 1：0.5 搅拌速度320r/min 培养时间：93h 3.磷酸盐对肌苷生成有很大影响 采用短小芽孢杆菌的腺嘌呤缺陷型发酵肌苷，可溶性磷酸盐如磷酸钾可以显著地抑制肌苷的累积，而不溶性磷酸盐如磷酸钙可以促进肌苷的生成。相反地，采用产氨短杆菌的变异株时，肌苷发酵并不需要维持无机磷的低水平，即使添加2%磷酸盐，也能累积大量的肌苷。 2.纯化：经769活性炭柱吸附肌苷，先用2-3倍体积的水洗涤，后用70-80℃水洗，再用70-80℃、lmol/L氢氧化钠浸泡30min，最后用0.0lmol/L氢氧化钠洗脱肌苷， 3.浓缩：收集洗脱液真空浓缩至1.170g/ml 4.结晶：pH11或pH6放置，结晶析出，过滤，得肌苷粗制品。 3)为了积累腺苷，凡属腺苷分解酶的核苷酶或核苷磷酸化酶的活性必须微弱。 4)必须解除AMP类物质终产物反馈调节。可选育抗代谢类