IL12在牙龈卟啉单胞菌脂多糖促泡沫细胞形成过程中的作用.docVIP

IL12在牙龈卟啉单胞菌脂多糖促泡沫细胞形成过程中的作用 作者：闫福华 吴春芳 李厚轩 雷浪 骆凯 孔宁静 【摘要】 目的 观察白细胞介素12(IL12)预刺激在牙龈卟啉单胞菌脂多糖(P.gingivalis LPS)促泡沫细胞形成过程中对细胞因子的影响。 方法 用氧化低密度脂蛋白(oxLDL)将人THP1单核细胞来源的巨噬细胞诱导48 h形成泡沫细胞。在巨噬细胞和泡沫细胞培养液中分别加入IL12作用2 h后，巨噬细胞培养液中加入oxLDL和 P.gingivalis LPS，泡沫细胞培养液中加入P.gingivalis LPS。使用ELISA法检测培养液上清中IL1β和肿瘤坏死因子α(TNFα)的水平，实时定量PCR检测细胞内IL1β、IL10、IL12和IL18 mRNA的转录水平。 结果 在泡沫细胞形成过程中，IL12预刺激可以降低培养液上清内TNFα水平，降低细胞内IL10和IL12 mRNA转录水平;泡沫细胞受P.gingivalis LPS刺激过程中，IL12预刺激可以增加培养液上清IL1β水平，减少细胞内IL18 mRNA的转录水平，增加IL10 mRNA的转录水平。 结论 IL12预刺激影响P.gingivalis LPS促泡沫细胞形成过程中炎症细胞因子的转录和分泌。 【关键词】 脂多糖类; 卟啉单胞菌，牙龈; 白细胞介素12; 巨噬细胞; 低密度脂蛋白类 白细胞介素12(interleukin 12,IL12)主要是由单核/巨噬细胞分泌表达的一种细胞因子，其相对分子量为75 KD，是由不同基因编码的2个亚基p35和p40通过二硫键结合在一起的异二聚体。IL12具有广泛的生物学活性，它能促进NK细胞和T细胞的增殖、活化及细胞毒作用;促进巨噬细胞的活化，并诱导多种细胞因子的产生;调节Th0细胞向Th1细胞分化增殖，增强细胞的免疫功能[1]。有研究表明，通过注射IL12于LDLr/小鼠体内可诱导其产生IL12抗体，可以减少小鼠体内动脉粥样硬化病损形成[2]。脂多糖(lipopolysacchride, LPS)是牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis，P. gingivalis)细胞壁的重要成分，能激活宿主的先天免疫系统，与牙周炎的发生和 发展 有密切的关系。LPS在进入血液后，在脂质聚集部位可以同细胞表面结构TLR2和TLR4以及与糖基化磷脂酰肌醇(glycosylphosphatidylinosito，GPI)结合的CD14相结合，从而诱发炎症反应[3]。 P.gingivalis的活菌、外膜泡及其LPS在氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotEin，oxLDL)存在时均能诱导单核/巨噬细胞形成泡沫细胞，并且在激活的巨噬细胞中影响脂质代谢[4]。本实验目的在于了解IL12在P.gingivalis LPS促进泡沫细胞形成过程中对细胞因子的影响，进一步了解牙周致病物质在促进动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)发生发展中的发病机理。 　 　1 材料和方法 　　1.1 材料 人单核细胞株THP1(ATCC， 中国 科学 院上海生命科学研究院传代分装);胎牛血清(北京Hyclone公司);PMA(美国Sigma公司);oxLDL(协和医科大学生化教研室脂蛋白组，北京协和三友科技有限公司);肿瘤坏死因子α(TNFα)和IL1β ELISA检测试剂盒(北京晶美生物公司);荧光定量 PCR 仪( PRISM 7700，美国Applied Biosystems公司);P.gingivalis LPS(美国Invivogen公司);IL12(美国PeproTech公司)。 　　1.2 方法 　　1.2.1 THP1单核细胞的分化 人THP1细胞为悬浮细胞，以含100 mL/L胎牛血清的RMPI 1640培养基于37 、50 mL/L的CO2培养箱中培养扩增。此后按不同的实验目的接种在6孔板内，以160 nmo1/L的PMA诱导36 h使其分化为巨噬细胞，然后使用无血清培养基培养24 h，以去除PMA对巨噬细胞的影响并且同步化细胞，再用于实验。 　　1.2.2 实验分组 为研究IL12在P.gingivalis LPS促进巨噬细胞吞噬oxLDL形成泡沫细胞过程中的影响，巨噬细胞按下面分组加入培养液：(1)空白对照组：以 RPMI 1640培养基培养;(2)oxLDL+LPS组：以RPMI 1640+50 μg/mL oxLDL+1 μg/mL P.gingivalis LPS共同培养;(3)IL12 2 h+oxLDL+LPS组：在RPMI 1640培养基中加入10 ng/mL IL12作用2 h后，再加入50 μg/