仪器分析课件第7章-分子发光分析法.pptVIP

7-4-1 定量分析方法——工作曲线法 （1）校准曲线法 F Cs Fx Cx （2）标准对照法（比较法） 如果荧光物质的校准曲线通过零点，就可以选择其线性范围内某一浓度的标准溶液，用标准对照法测定。 7-4-2 应用 1. 无机化合物的分析 很多无机离子能与一些有机试剂形成荧光络合物而被测定，这种试剂称为荧光试剂，这种方法称为直接荧光法。还有一些无机离子，它们不能形成荧光络合物，但能使其他物质的荧光减弱，可利用荧光猝灭法测定。 （1）直接荧光法：铍、铝、硼、镓、硒、镁、稀土 （2）荧光猝灭法：氟、硫、铁、银、钴、镍 2. 有机化合物的分析 此外，药物中的胺类、甾族类、抗生素、维生素、氨基酸、蛋白质和酶等大多具有荧光，可用荧光法测定。 7-5 化学发光分析法（自学） 化学发光是由化学反应提供的能量激发物质产生的光辐射。 发生于生物体的化学发光，称为生物发光。 利用化学发光而建立起来的方法，称为化学发光分析法。 7-5-1 化学发光分析法的基本原理 1. 化学发光分析法的基本原理 化学发光是吸收化学反应过程产生的化学能，而使反应产物分子激发所发射的光。任何一个化学发光反应都应包括化学激发和发光两个步骤。 化学发光反应效率? CL，又称化学发光的总量子产率。它决定于生成激发态产物分子的化学激发效率?CE和激发态分子的发射效率?EM。定义为： ?CL =发射光子的分子数 / 参加反应的分子数= ?CE??EM A P* P+hv 激活 发光 化学发光必须满足如下条件： （1）化学反应必须提供足够的激发能，激发能主要来源于反应焓。 （2）要有有利的化学反应历程，使化学反应的能量至少能被一种物质所接受并生成激发态。 （3）要观察到化学发光，激发态能释放光子或能够转移它的能量给另一个分子，而使该分子激发，然后以辐射光子的形式回到基态。 （4）由于化学激活的瞬时性，激活能必须由某一步骤单独提供，否则，前一步反应所释放出的能量将会因分子振动而被消耗掉。 化学发光反应的发光强度IcL以单位时间内发射的光子数表示。它等于化学发光效率?CL与单位时间内起了反应的被测反应物A浓度的变化的乘积，即 ICL(t)= ?CL ? dcA/dt 式中ICL(t)表示t时刻的化学发光强度， ?CL是与分析物有关的化学发光效率dcA/dt是分析物参加反应的速率。 2. 化学发光的强度 7-5-2 化学发光的类型 1. 直接化学发光和间接化学发光 直接发光是被测物作为反应物直接参加化学发光反应，生成电子激发态产物分子，此初始激发态能辐射光子。 A + B? C* + D C* ? C + h? 式中A或B是被测物，通过反应生成电子激发态产物C* ， 当C* 跃迁回基态时，辐射光子 间接发光是被测物A或B，通过化学反应生成初始激发态产物C* ， C* 不直接发光，而是将其能量转移给F，使F跃迁回基态，产生发光。 A + B? C* + D C*+F? F* + E F* ? F + h? 式中C*为能量给予体，而F为能量接受体。 2. 气相化学发光 主要有O3、NO、S的化学发光反应，可用于监测空气中的O3、NO、SO2、H2S、CO、NO2等。 （1）臭氧的化学发光反应 （2）氮氧化物的化学发光反应 （3）利用氧原子的化学发光反应 3. 液相化学发光 用于此类化学发光分析的发光物质有鲁米诺、光泽碱、洛粉碱等。 例如，利用发光物质鲁米诺，可测定痕量的H2O2以及Cu、Mn、Co、V、Fe、Cr、Ce等金属离子 7-5-3 化学发光的测量仪器 化学发光分析法的测量仪器主要包括 样品室、光检测器、放大器和信号输出装置。 化学发光反应在样品室中进行，样品和试剂混合的方式有不连续取样体系，加样是间歇的。将试剂先加到光电倍增管前面的反应池内，然后用进样器加入分析物。另一种方法是连续流动体系，反应试剂和分析物是定时在样品池中汇合反应，且在载流推动下向前移动，被检测的光信号只是整个发光动力学曲线的一部分，而以峰高进行定量测量。 7-5-4 化学发光分析法的特点及应用 化学发光最显著的特点是： 灵敏度高，其检出限可达10-15 mol/L 线性范围宽，一般可达4-5个数量级 操作简单，易于实现自动化 所用仪器设备简单，不需要光源和单色器，无光散射及杂散光引起背景值的干扰 应用：表7-6和表7-7 补充：磷光分析法 磷光和荧光都是光