质粒DNA限制性酶切图谱剖析.pptVIP

五、注意事项——DNA凝胶电泳 六、限制性内切酶酶切常见问题分析 六、限制性内切酶酶切常见问题分析 六、限制性内切酶酶切常见问题分析 五、限制性内切酶酶切常见问题分析 五、限制性内切酶酶切常见问题分析 五、限制性内切酶酶切常见问题分析 七、DNA电泳常见问题分析 七、DNA电泳常见问题分析 七、DNA电泳常见问题分析 七、DNA电泳常见问题分析 七、DNA电泳常见问题分析 DNA降解 电泳缓冲液陈旧 所用电泳条件不合适 DNA上样量过多 DNA样含盐过高 有蛋白污染 DNA变性 避免核酸酶污染 电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，pH值上升，缓冲能力减弱，从而影响电泳效果。建议经常更换电泳缓冲液 电泳时电压不应超过20V/cm，温度＜30℃；巨大DNA链电泳，温度应＜15℃；核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力 减少凝胶中DNA上样量 电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐 电泳前酚抽提去除蛋白 电泳前勿加热，用20mM NaCl缓冲液稀释DNA 问题一：DNA带模糊 原因 对 策 对于λ/Hind III片段cos位点复性 电泳条件不合适 DNA变性 电泳前于65℃加热DNA 5分钟，然后在冰上冷却5分钟 电泳电压不超过20V/cm；温度＜30℃；经常更换电泳缓冲液 以20mM NaCl Buffer稀释DNA，电泳前勿加热 问题二：不规则