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实验八 人类染色体核型分析
实验九 人染色体分带技术 目的和要求 1.掌握染色体G带制备的方法和基本原理。 2.了解染色体C显带技术。 实验原理 G带的形成与Giemsa染料的组成及染色特性有关。 Giemsa染料是由亚甲蓝，天蓝和伊红组成的复合染料，除伊红外，均为噻嗪类染料，它只与DNA中的PO43-基结合而不与蛋白质结合，所以染色体着色首先取决于两个噻嗪分子与DNA的结合，其次取决于一个有助于染料沉淀物积累的疏水环境。染色体上高浓度疏水性蛋白的区域有利于噻嗪-伊红沉淀物的形成，这些区域相当于含高比例二硫键的氧化态蛋白质区域，经一系列处理后显示暗带，而另一些区域则为含巯基的还原态蛋白质，为亲水性蛋白质，对染料亲和力低，所以不显色。 实验用品 主要仪器： （1）? 超净工作台 （2）? 大容量低速离心机 （3）? 二氧化碳培养箱和电热恒温培养箱 （4）? 电热恒温干燥箱 （5）? 水浴锅 （6）? 天平 （7）? 显微镜 实验材料和试剂 材料：人外周血 试剂：0.0125%胰蛋白酶（效价1:250，以生理盐水配制） Giemsa染液（1g Giemsa粉不断添加少量甘油充分研磨，甘油总量为60mL,倒入烧杯中于55-60℃水浴加热2小时，冷却后加入60mL甲醇，混匀后室温放置2-3天过滤，在棕色瓶中长期保存。 实验步骤 1.将老化7d的染色体标本浸入37℃ 0.0125%胰蛋白酶溶液中处理2分钟。 2.取出标本，在蒸馏水中漂洗后放入1：10 Giemsa染液中染色20-30分钟。 3.自来水冲洗，晾干，镜检。 显微镜观察 在显微镜下，可见分布在染色体全长上的宽窄不同的相间条带。带纹的多少随染色体的不同而异，另外还与染色体所处的时期不同而有所差异，一般中期染色体带纹较少，早中期与晚前期染色体的带纹较多，前期染色体多呈颗粒状。 人类染色体G-带照片 染色体核型分析 作业及思考题 1.在显微互动实验室捕获和提交人染色体G带核型并进行分析。 2.制片质量的关键步骤是哪些？ * * *
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