实验八 食品中大肠菌群的计数与分离.pptVIP

乳糖胆盐发酵管: 蛋白胨 20g 牛胆盐 5g 乳糖 10g 0.04%溴甲酚紫水溶液 25mL 水 1000mL pH 7.4 115℃ 15min 接种、培养时注意事项 样品充分震荡混合（10-1震荡10min）； 在梯度稀释和接种前后对试管震荡混合； 注意试管梯度的标记； 接种后放在试管架上37℃静止培养； 实验八 食品中大肠菌群的计数与分离 微生物学实验 实验五 * 实验目的与要求 实验目的 学习并掌握检测食品中大肠菌群的方法； 通过观察、计算分析了解食品中大肠菌群的存在的特点。 实验要求 2位学生一组协作完成； 选择10g鲜肉样品，观察大肠菌群的生长特征并测定大肠菌群的数量（mpn）； 分离纯化大肠菌群中的 一种（斜面菌种） * 实验五 预习要求 预习三步九管法的基本步序； 预习EMB平板的基本原理和菌落生长特征； 预习MPN表的使用方法； * 实验五 基本原理 关于大肠菌群 需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。 关于三步九管法 国家标准：即，乳糖发酵试验、分离培养和证实试验。 （初发酵、平板分离、复发酵）。 * 实验五 实验材料、仪器、试剂 仪器 高压灭菌锅、无菌培养皿、试管、吸管、接种环 、德汉氏小管、温箱、载玻片、酒精灯、显微镜等。 试剂 无菌生理盐水，牛肉膏，蛋白胨，NaCl，琼脂粉，伊红美兰琼脂培养基、水、乳糖、0.04%溴甲酚紫水溶液、胆盐等 * 实验五 实验内容 对样品的梯度稀释； 初发酵（乳糖胆盐发酵液）10管（三梯度9管+1管对照）； EMB平板分离，划线法接种 革兰氏染色； 大肠菌群计数（MPN检索表，数/100g）； * 实验五 本次实验报告要求 记录—— 三步九管法操作流程和各部结果。 结果分析—— 评述鲜肉中大肠菌群的存在特点。 * 实验五 思考问题 大肠菌群的定义是什么？ 为什么要选择大肠菌群作为水源被肠道病原菌污染的指示菌？ EMB培养基含有哪几种主要成分？在检查大肠菌群时，各起什么作用？ * 实验五 本次实验的基本要求与进行方式 两个同学一组 配制乳糖胆盐培养基（150mL）,分装于试管中（10个），高压灭菌； 分装生理盐水：90mL（三角瓶1个），9mL（试管5个），高压灭菌； 移液管，培养皿，干热灭菌； 梯度稀释（10倍递增）的同时接种 * 实验五 稀释与接种 * 实验五 10-1 10-3 10-4 10-5 90mL 9mL 10g样品 1mL10-1样品稀释液 9mL 1mL10-2样品稀释液 1mL稀释液 平行实验？ 对照实验？ 10-2 时间安排 此实验为综合性实验，要求对食品中存在的大肠菌群计数并分离。实验安排三天： 第一天： 两人一组配制乳糖胆盐发酵培养基。制备食品悬液。并进行梯度稀释，接种。培养。 第二天： 观察记录初发酵结果（产酸、产气、混浊度、沉淀情况）。配制EMB平板。对阳性试管进行划线接种。 第三天： 记录EMB平板培养结果，对可疑菌落进行革兰氏染色。查MPN检索表，计数分析。