实验六酵母菌的形态观察及细胞计数板计数.pptVIP

实验六 酵母菌的形态观察及  血细胞计数板计数 一、目的要求 1.观察酵母菌的形态特征及出芽生殖方式，学习区分 酵母菌死活细胞的实验方法。 2.掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。 3.明确血细胞计数板计数的原理，并掌握用其进行微 生物计数的方法。 二、基本原理-形态观察 酵母菌是单细胞真菌，圆形、卵圆形或圆柱形，细胞大小约为1~5μmＸ5~30μm，多数以出芽方式进行无性繁殖，有性繁殖是通过子囊孢子的方式进行。 美蓝染液的氧化型为蓝色，还原型为无色。由于酵母细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色。 二、基本原理-计数 用血细胞计数板计数是一种常用的微生物计数方法。该计数板是一块特制的载玻片，由四条槽构成三个平台，中间较宽的平台被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格框共分为九个大方格，中间的大方格即为计数室。 计数室的刻度有两种规格：25x16；16x25 。计数室的容积为0.1mm3（万分之一毫升） 。计数时，先数五个中方格的总菌数，求得每个中方格的平均值，再乘以25或16，得出大方格的总菌数，再换算成1ml菌液中的总菌数。 三、器材 1.菌种 酿酒酵母 （Saccharomyces cerevisiae)平板菌落及菌悬液 2.溶液或试剂 吕氏碱性美蓝染液 3.仪器及用具 显微镜 血细胞计数板 无菌毛细滴管 载玻片 盖玻片 双层瓶 擦镜纸 四、操作步骤 （一）酵母菌形态观察 1. 在载玻片中央滴一滴0.1%吕氏碱性美蓝染液 ，然后按无 菌操作挑取少量酵母菌苔放在染液中，混合均匀。 2. 用镊子取一盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将 盖玻片放下使其盖在菌液上。 3. 将制片放置约3min后镜检，先用10X，再用40X观察酵母 的出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。 4. 染色约0.5h后再次进行观察，注意死细胞数量是否增加。 （二）血细胞计数板计数 1. 菌悬液的制备 以无菌生理盐水将酿酒酵母制成浓度适当的菌悬液。 2.镜检 在加样前，先对计数室进行镜检。 3.加样品 计数板上盖上盖玻片，用无菌的毛细滴管将摇匀的菌悬液由盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室。 4. 显微镜计数 加样后静止5min，先用10X观察，再用40X进行计数。 Attention： a. 光线的强弱适当； b. 一般样品稀释度要求每小格内约有5~10个菌体； c. 每个计数室选5个中格中的菌体进行计数，位于格线上的 菌体一般只数上方和右边线的； d. 芽体大小达到母细胞的一半时，即作为两个菌体计数； e. 从两个计数室中计得的平均数值来计算样品的含菌量。 5. 清洗 使用完毕后，将计数板在水龙头上用水冲洗干净，切勿用硬物洗刷。 五、实验报告 结果部分 1.绘图说明所观察到的酵母菌的形态特征。 2.按书上列表记录计数结果。 * * 如何鉴定死活细胞 * * *