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实验十四小鼠骨髓细胞染色体制片
实验十四 小鼠骨髓细胞染色体 制片 实验目的 掌握制作动物骨髓细胞染色体标本的方法，练习染色体制片技术。 了解小鼠染色体的形态和数目。 实验原理 染色体（chromosome）在间期细胞中见不到，它只在分裂细胞中出现。因此从理论上讲，任何处于分裂状态的细胞都可以作为染色体标本制备的材料。染色体在分裂中期是最典型的。用适量的秋水仙素溶液注入动物体内，可抑制分裂细胞纺锤体的形成，使分裂终止在中期，积累大量的中期细胞，再通过常规的制片方法，可获得动物染色体标本。 实验材料与试剂 材料：小白鼠 试剂：秋水仙素，氯化钠低渗液，甲醇-冰乙酸（固定液）生理盐水，姬姆萨染色液。 实验方法 选择体重18-20克的健康小白鼠，在实验前3-4小时注射秋水仙素（2ug/g体重）。 用颈椎脱臼法处死小白鼠，从背部剪开肢体皮肤和肌肉，取出完整的股骨，用生理盐水洗净。 收集细胞：将股骨放入培养皿中（加入生理盐水）用止血钳夹碎，吸取上清夜，移入离心管，1500rpm离心8分钟，留沉淀。 低渗处理：用预热氯化钾溶液6毫升，轻轻混匀，37°C保温20分钟，加入新鲜固定液1毫升， 预固定。 实验方法 沉淀加5毫升固定液1500rpm离心8分钟，留沉淀。（反复2次） 制备细胞悬液：沉淀加入0.5毫升新鲜固定液，混匀制成细胞悬液。 滴片：用吸管吸取少量悬液，在离载玻片30cm高度滴2滴于载玻片上，沿斜面吹散，再酒精灯上微烤，晾干。 染色：用姬姆萨染液染色10-15分钟。冲洗，晾干，显微镜观察。 观察 在显微镜寻找分散良好的中期分裂相。小白鼠染色体一般呈“U”形，都为近端着丝粒染色体。染色体数2n=40。 实验结果 实验报告与思考题 根据实验过程分析实验结果，分析原因，总结经验。 制备染色体标本时，为什么用秋水仙素，作用是什么？ 制片过程中，为什么要进行固定？ * *
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