分子生物学讲座5.ppt

* * 1、原核生物启动子的基本结构 二、启动子（promoter） Pribnow box -35区 -10区 +1，起始点 上游 | 约17bp | 原核生物启动子 2、真核生物启动子的基本结构 真核生物的启动子有其特殊性，真核生物有多种RNA聚合酶，每一种都有自己的启动子类型。以RNA聚合酶Ⅱ的启动子结构为例，人们比较了上百个真核生物RNA聚合酶Ⅱ的启动子核苷酸序列的结构，发现在-25区有TATA框，又称为Hogness框或Goldberg-Hogness框。其一致序列为T28A97A93A85A63T37A83A50T37，基本上都由A，T碱基所组成，又叫 TATA框。 Hogness box TATA box -75区 -25区 +1，起始点 上游 CAAT box TATA框决定了转录的起始部位，即RNA聚合酶要和它结合才可以开始转录。CAAT框则决定了转录的起始频率。 由于真核生物突变体的诱导和鉴定非常困难，所以，真核生物启动子的研究远比原核生物困难。 除启动子外，真核生物转录起始点上游处还有一个称为增强子的序列，它能极大地增强启动子的活性，它的位置往往不固定，可存在于启动子上游或下游。 在原核生物中，当RNA聚合酶的?亚基发现其识别位点（ -35区）时，全酶就与启动子的-35区序列结合形成一个封闭（指DNA为双链状态）的启动子复合物。由于全酶分子较大（大约可以覆盖70bp的长度），其另一端可到达-10区。这时，整个酶分子向-10序列转移并与之牢固结合，在此处发生局部DNA的解链（一般在12-17bp左右），形成全酶和启动子的开放性（DNA为单链状态）复合物。 三、转录的开始和延伸 在复合物中起始位点和延长位点被相应的核苷酸充满，在RNA聚合酶β亚基催化下形成RNA的第一个磷酸二酯键。RNA合成的第一个核苷酸总有GTP或ATP，以GTP常见。 此时?因子就完成了它这一次起始的使命，从全酶解离下来，靠核心酶在DNA链上向下游滑动，而脱落的?因子与另一个核心酶结合成全酶，可以反复利用。 真核生物的转录起始机制非常复杂，还不是很清楚。因为有多种转录酶，每一种都有它的特异性。但是，可以知道的是，有许多蛋白质转录因子要参与起始和延伸。（参考p408-410） 转录的速度：30-50bp/秒，但不是恒定的，会有变化。 四、转录的终止（Termination) 转录是在DNA模板某一位置上停止的，人们比较了若干原核生物RNA转录终止位点附近的DNA序列，发现DNA模板上的转录终止信号有两种情况: 一类是不依赖于蛋白质因子而实现的终止作用， 一类是依赖蛋白质辅因子才能实现终止作用，这种蛋白质辅因子称为释放因子，通常又称ρ因子。 两类终止信号有共同的序列特征，在转录终止之前有一段回文结构。 不依赖ρ因子的终止序列中富含G·C碱基对，其下游6-8个A。 依赖ρ因子的终止序列中G·C碱基对含量较少，其下游序列也没有固定的特征，转录生成的RNA可形成二级结构即柄一噜噗结构，又称发夹结构。这样的二级结构可能与RNA聚合酶某种特定的空间结构相嵌合，阻碍了RNA聚合酶进一步发挥作用 。 除DNA模板本身的终止信号外，在?噬菌体中，发现一些蛋白质有协助RNA聚合酶跨越终止部位的作用，叫抗转录终止蛋白。 终止序列的特征： 真核生物由于RNA转录后很快就进行了加工，因此很难确定原初转录物的3’末端。病毒SV40的终止位点经过研究发现，很像大肠杆菌的不依赖ρ因子的终止子，转录后的RNA可形成一个发夹结构，3’末端带有一连串的U。爪蟾5sRNA的3’末端有4个U，它们前后的序列为富含G·C的序列，这是所有真核生物RNA聚合酶Ⅲ转录的终止信号。这种序列特征高度保守，从酵母到人都很相似，任何改变这种序列特征的突变都将导致转录终止位置的改变。 第二节 RNA转录后的加工与修饰 提示： 原核或真核生物的rRNAs和tRNAs都是以初级转录本(transcript)形式被合成的，然后加工成为成熟的RNA分子。 绝大多数原核生物的mRNA却不需加工，仍为初级转录本的形式。 真核生物产生的mRNA要经过复杂的加工才能成为成熟的RNA。加工过程大致分为四种。 一、mRNA的转录后加工 1、原核生物 转录生成的一条mRNA可以包含几个基因，有共同的启动子和共同终止信号，编码几种不同的蛋白质。例如乳糖操纵子上的Z、Y及A基因，转录生成的mRNA可翻译生成三种酶，即半乳糖苷酶，透过酶和乙酰基转移酶。原核生物中没有核膜，所以转录与翻译是连续进行的，往往转录还未完成，翻译已经开始了，因此原核生物中转录生成的mRNA没有特殊的转录后加工修饰过程。 2、真核生物