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陈羽迪 2012332870002 12生物制药（1） 茶叶中茶多酚的粗提取与含量测定实验报告 一、实验目的： 1、了解并熟悉茶多酚的元素组成、结构构成、理化性质。 2、掌握 3、掌握酒石酸铁比色法测定茶多酚的含量的原理及操作 实验仪器： 分光光度计、干燥箱、电子天平 、pH计、真空泵、纱布、漏斗、旋转蒸发仪、250ml 容量瓶、50ml 容量瓶、分液漏斗 实验材料： 干茶叶（市售散装茶即可） 实验试剂： 硫酸亚铁 (FeSO4·7H2O) ，酒石酸钾钠 (KNaC4H4O6·4H2O) ，磷酸氢二钠 (Na2HPO4·12H2O) ，磷酸二氢钠 (NaH2PO4·2H2O) ，乙酸乙酯。 四、实验步骤与方法 1、溶液的配制 酒石酸亚铁溶液制备：称取0.25 g （准确至0.0001）硫酸亚铁，1.25 g酒石酸钾钠（准确至0.0001），用水溶解并定容至250 ml（低温保存，有效期10天）。 2、干茶叶的预处理 将干茶叶洗净、晾干，烘干，最后粉碎。粉碎的目的是与液体的接触面增大使提取率增高。由于试验条件的限制，用剪刀代替粉碎机将干茶叶剪碎，并且用研钵研细，干茶叶量为50. 00g。 3、茶多酚的粗提取与定性检测 称取经过预处理的干茶叶末30. 00g，加入 250mL 90℃接近沸水中搅拌浸提、过滤，先后用 250mL的乙酸乙酯萃取两次。合并两次有机相。减压蒸馏除去乙酸乙酯溶剂得黄色粉末状茶多酚。从外观上看，为黄色粉末状。物理性能为，易溶于水及乙醇，味苦涩。 4、茶多酚溶液的配置与含量的测定 称取步骤3中提取的茶多酚粉末0.2500g，加水溶解定容至 250mL，混匀 ，即为每毫升含 1mg步骤3中提取的茶多酚粉末的溶液。 分别取茶多酚溶液1. 0mL、2. 0mL、3. 0mL、4. 0mL于 4个 50mL容量瓶中，各加水至10mL，再加酒石酸亚铁溶液 10mL，加入 pH为 7. 5的磷酸缓冲液至刻度，混匀后用1cm比色皿，以空白试剂作参比，于波长 540nm处测定吸光度 A，计算实验数据，并绘制实验数据表格。五、实验现象和数据处理 将高山茶叶磨成粉末，加入蒸馏水得混有粉末的深绿色液体，水煮后颜色变黄，变为草绿色。乙酸乙酯萃取后，上层浅黄色透明溶液，下层墨绿色浑浊液体，两相间的乳化层有大量较大气泡。轻微摇晃后气泡消失分层明显。经过旋蒸后得0.79g黄色粉末茶多酚。茶多酚溶液加入酒石酸亚铁溶液后颜色变为蓝紫色，颜色随茶多酚浓度增加而变深。 ω—茶多酚的含量，A—样品溶液的吸光度值，T—样品溶液的总体积mL） V—测定用样品溶液的量mL)，m—样品质量 3.913—用1cm比色杯，当吸光度为1.0时，试液中茶多酚的浓度为3.913mg/mL) 表 1 实验次数 A T (mL) V (mL) m (g) ω（%） ω（mg/g) 1 0.104 50 3 0.001 6.783 67.8 2 0.223 50 3 0.002 7.272 72.7 3 0.362 50 3 0.003 7.870 78.7 4 0.463 50 3 0.004 7.549 75.5 5、实验结果检验——绘制茶多酚标准曲线 根据步骤4中所得的实验数据，绘制茶多酚标准曲线，斜率R处于0.95-1.05之间方可达到实验要求。 表 2 V(mL) 1.0 2.0 3.0 4.0 A 0.104 0.223 0.362 0.463 ω (mg/g) 67.8 72.7 78.7 75.5 R=0.813 六、注意事项 1、磷酸盐缓冲液在常温下容易生长霉菌，放冰箱中保存或临用时现配。 2、茶多酚溶液应保持澄清，若溶解后溶液浑浊应先过滤。 3、实验前需仔细阅读分光光度计使用说明书及注意事项。 4、若茶多酚标准曲线斜率R不介于0.95-1.05之间，则实验数据无效。 七、实验结果与分析 本次实验，所采用的测定方法主要为酒石酸亚铁比色法。茶叶中多酚类物质能与亚铁离子形成紫蓝色络合物，用分光光度法测定其含量。利用比色法进行测定，可以有效地避免由视觉产生的误差，加以检验后可以得到较为准确的数据。 但经实验证明，酒石酸亚铁比色法测定的茶多酚含量明显偏高。下表为杭州茶叶研究院用两种比色法测定茶叶中茶多酚含量的实验结果。 表 3 名称 干物率 茶多酚含量（%） Folin试剂比色法 酒石酸亚铁比色法 龙井 95.2 18.9 33.3 碧螺春 92.9 20.6 26.9 特级滇红 90.2 12.4 16.8 冻顶乌龙 96.9 14.4 19.8 铁观音 95.6 14.1 21.0 普洱熟饼 90.3 6.1 8.8 造成以上差异的原因有以下三点：第一，酒石酸亚铁比色法测得的是茶叶中多酚类物质的总