巴西橡胶树LIM结构域基因克隆与生物信息学分析.pdf

第 1卷第 1期 热 带 生 物 学 报 V01．1No．1 2010年3月 JOURNALOFTROPICALORGANISMS MaL2010 文章编号：1674—7054(2010)01—0062一O5 巴西橡胶树 LIM结构域基因克隆与生物信息学分析 吴 瑞 ，朱家红 ，张全琪 ，张治礼 ， (1．海南大学 农学院，海南 海VI570228；2．中国热带农业科学院热带作物生物技术研究所， 农业部热带生物技术重点开放实验室，海南 海Vl571101；3．海南省农业科学院，海南 海口571000) 摘 要：根据乙烯利刺激 巴西橡胶树 (Heveabrasiliensis)胶乳差异表达 cDNA文库的EST序列信息，利用 RACE技术从胶乳中成功克隆了1个含有LIM结构域的未知功能新基因HbLIM的全长cDNA。生物信息学 分析表明，该基因全长cDNA由1016bp的碱基组成，拥有 1个570bp的开放阅读框编码 189个氨基酸残 基；推测氨基酸序列富含Lys，Ser，Ala和Leu，含有2个 LIM结构域和2个N一豆蔻酰化位置。序列相似性分 析表明，HbL1M编码的氨基酸序列与蓖麻、杨毛、葡萄相应的LIM基因的相似性高达98％，95％和92％。这 些研究结果为深入探讨 uM结构域蛋白在巴西橡胶树乳管发育及乳管代谢中的功能奠定了基础。 、 关键词：巴西橡胶树；基因克隆；LIM基因；生物信息学 中图分类号：S794．1；Q785；Q811．4 文献标志码：A LIM结构域蛋白是一个重要的发育调控因子，广泛参与动物、植物以及微生物细胞的发育调控过程， 包括基因转录、细胞形态建成和信号传导等 j。在真核生物中，LIM结构域蛋白通常含有 1个或多个LIM 结构域。植物 LIM结构域蛋白存在于细胞质或细胞核中 J，富含半胱氨酸和组氨酸，通常含有 1个或多 个 LIM结构域及 1个长的碳末端结构域且富含一段甘氨酸的重复 J。Baltz证实，向日葵花粉LIM结构 域蛋白基因sp3(后来命名为HaPLIM1)与花粉管生长有关 J。烟草中的NtLIM可能参与了激动蛋白细 胞骨架的稳定 J。由于大多数细胞类型的细胞核中都能检测到向日葵 HaWLIM1蛋 白，人们推测植物 LIM蛋白可能与动物LIM蛋白一样也参与了基因转录，其可能是通过聚集和稳定转录复合体起作用口， 随后这一推测在烟草中得到证实 。乙烯利刺激橡胶树增产技术已被广泛应用于天然橡胶生产，但关 于乙烯利刺激橡胶树增产过程中的信号转导、增产机理等分子基础仍不清楚。为阐明乙烯利刺激橡胶树 增产的分子基础，本研究组成功构建了乙烯利诱导条件下的胶乳抑制性削减文库，并获得了一批差异表 达的EST序列，其中No．123EST序列编码的蛋白和其他植物来源的LIM蛋白具有较高的同源性。这表 明，胶乳LIM基因的表达受到了乙烯利的调控，并可能参与了乙烯利刺激橡胶树增产过程的分子调节。 另外，巴西橡胶树的乳管组织是合成和贮存胶乳的地方 J，由一类特化的细胞组成，LIM结构域蛋白是否 参与了乳管细胞 内细胞骨架的稳定也有待证实。根据No．123EST的序列信息，笔者利用 RACE—PCR技 术从胶乳中成功克隆了 1个含有 LIM结构域的未知功能新基因的全长 cDNA，并对其序列结构和特征进 行了分析。研究结果为深入探讨 LIM结构域蛋 白在巴西橡胶树乳管发育及乳管代谢中的功能奠定了 基础。 1 材料与方法 1。1 材料 实验材料取于中国热带农业科学院实验场种植的巴西橡胶树 (Heveabrasiliensis)热研 7— 33—97。 收稿 日期：2009—10—26 基金项目：国家 自然科学基金 ；中央级公益性科研院所业务费专项资金 (ITBBZD0716) 作者简介：吴瑞 (1984一)，女(彝)，云南个旧市人，海南大学农学院2007级硕士研究生． 通信作者：张治礼 (1970一)，男，海南省农业科学院副院长，副研究员，博士．Email：zzl_catas@hotmail．corn 第 1期 吴 瑞等：巴西橡胶树 LIM结构域基因克隆与生物信息学分析