成骨细胞的数量对体外钙化结节形成的影响_0.docVIP

成骨细胞的数量对体外钙化结节形成的影响 关键词：细胞 【摘要】 目的 了解体外培养成骨细胞的接种数量对钙化结节形成的 影响 。 方法 实验选用了1×105个/ml、2×105个/ml、5×105个/ml三个不同的细胞接种浓度，并且每个浓度组分别给予含β-甘油磷酸钠和维生素C的条件培养液以及常规培养液进行细胞培养。显微镜观察钙化结节的形成，并做钙化结节染色。结果 在培养30天内，条件培养液或常规培养液培养的5×105个/ml组细胞无结节形成；而2×105个/ml组和1×105个/ml组都有钙化结节形成，而且有细胞越少形成结节越早，数量越多的趋势；给予条件培养液又较常规培养液培养有结节形成早而多的趋势。钙化结节染色显示结节为红色。结论 体外培养成骨细胞钙化结节的形成须接种适宜的细胞数量，用条件培养液培养细胞能促进钙化结节形成。 【关键词】 成骨细胞； 钙化结节； 体外培养 Observation of cultured osteoblasts forming mineralization nodes in vitro 【Abstract】 Objective To investigate whether osteoblasts cultured in vitro can form mineralization nodes. Method The osteoblasts at 1×105/ml,2×105/ml and 5×105 /ml cell density were cultured in the DMEM medium and in the DMEM medium supplemented with β-glycerophosphate sodium and ascorbic acid. The formation process of mineralization nodes were observed with microscope and calcified nodules stain was made. Results There were more mineralization nodes to form in shorter time in the 1×105/ml cell density group compared with in the 2×105/ml cell density group, but in the 5×105/ml cell density group, there were not, and with the DMEM medium contained β-glycerophosphate sodium and ascorbic acid, mineralization nodes formed more early compared with the DMEM medium. Mineralization nodes stain showed red.Conclusion Cultured osteoblasts at suitable cell density can easily form mineralization nodes in vitro, and β-glycerophosphate sodium and ascorbic acid just promote formation of mineralization nodes. 【Key words】 osteoblast; mineralization nodes; in vitro 随着成骨细胞体外培养技术的 发展 ，其体外培养成为骨组织工程及骨替代材料 研究 的一种重要手段。成骨细胞的体外钙化对提取的成骨细胞鉴定及其在材料表面的生物学效应的研究尤为重要，经观察发现成骨细胞的接种数量对其钙化有影响, 而国内外 文献 未见关于这方面的报道。因此，有必要对成骨细胞体外钙化形成条件作以报道，为骨替代材料的研究提供实验依据。 1 材料与方法 1.1 材料与主要试剂 日本大耳白幼兔，出生10～15天，由 中国 预防医学 科学 院提供。常规DMEM培养液内含DMEM培养基（Gibco），10% 胎牛血清（Hycolon）， 100U/ml青霉素,100μg/ml链霉素。条件DMEM培养液为常规DMEM培养液中补加10mmol/L β-甘油磷酸钠和50μg/ml维生素C。 1.2 兔成骨细胞体外分离与培养 以幼兔的颅盖骨为材料，采用组织块法［1］分离提取原代成骨细胞，置于37℃, 5%CO2培养箱中培养，细胞生长至100％融合后，进行传代培养并反复纯化。 1.3 钙化结节标本制备 取第六代成骨细胞