抗核小体抗体的检测与临床应用进展_0.docVIP

抗核小体抗体的检测与临床应用进展 ［摘 要］ 核小体是染色体的功能亚单位，是DNA与组蛋白形成的复合体，存在于细胞核中。在系统性红斑狼疮(SLE)发生中，核小体是主要的自身抗原，抗核小体抗体是SLE的早期的指标之一。许多 文献 认为抗核小体抗体是诊断SLE很好的标志，它优于抗dsDNA，敏感度高，且有很高的特异度。抗核小体抗体主要 应用 ELISA法检测，由于核小体抗原纯化制备 方法 的不同，抗核小体抗体的检测方法也由第一代 发展 到第二代。随着抗原纯化技术的提高，极大提高了抗核小体抗体对SLE的特异性，已开始应用于临床常规检测。 　　［关键词］ 核小体；自身抗体；系统性红斑狼疮 　　核小体是染色体的功能亚单位，是DNA与组蛋白形成的复合体，存在于细胞核中。传统的观点认为，dsDNA、抗dsDNA抗体复合物在狼疮肾炎发病机制中起主要作用，但是游离、裸露的DNA在血液循环中并不存在［1］。有人从系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血中检测到核小体，证实DNA是以核小体的形式存在于外周循环中［2］，确定了外周血中游离的核小体是细胞凋亡所产生的寡聚核小体，并认为在SLE发生中，核小体是主要的自身抗原，并且这种核小体的免疫原性很强，驱动辅助T细胞进行自身免疫应答，诱导产生抗核小体抗体(antinucleosome antibodies, AnuA)。有实验表明，AnuA仅对天然的核小体以及核小体亚结构(H2AH2B)DNA起作用，而并不与其中的DNA或组蛋白起反应，且AnuA的形成又先于抗dsDNA抗体和抗组蛋白抗体的产生，因而AnuA可能是SLE的比较早期的指标。近年来，虽然国内对AnuA 研究 尚少，但其对SLE的诊断价值在国际上已成为一个热门话题，认为AnuA是诊断SLE很好的标志，它优于抗dsDNA，敏感度高，且有很高的特异度［3］，AnuA主要应用ELISA法检测。近年由于抗原纯化技术的提高，极大提高了AnuA对SLE的特异性，已开始应用于临床常规检测。本文将针对核小体及其自身抗体的检测方法、分离纯化技术、临床特异性以及近期新的研究进展进行一综述和讨论。 　　1 核小体的结构 　　核小体(nucleosome)是真核细胞染色质基本重复结构的亚单位，对于细胞核中DNA的组成非常重要。在 电子 显微镜下，核小体呈“串珠”状，染色质原纤维就象一条串珠，由紧密排列的核小体组成。核小体的核心含有成对出现的四种核心组蛋白(histone)H2A、H2B、H3和H4，8个带正电荷的组蛋白分子(H2A、H2B、H3和H4各2个分子)形成组蛋白八聚体，146个双螺旋DNA碱基对环绕其两周，呈扁圆形，分别由2个H3和H4分子组成的四聚体复合物，构成核小体核心颗粒的内部(如图1左)。H2AH2B二聚体位于核小体的表面，此结构H1占据核小体顶部位置，通过50 bp～60 bp的DNA链与相邻核小体连接，H1参与螺旋DNA的聚合和解离(如图1B)。 　　图1 核小体的基本结构(图1A为核小体核心颗粒)（略） 　　近年研究表明，核小体是SLE的主要自身抗原，可能与SLE发病及病理变化直接相关。SLE患者细胞凋亡异常导致的核小体过度释放，可能是本病免疫异常的主要诱发环节之一。核小体及其特异性自身抗体除了在致病机制方面成为近年来SLE研究的最活跃的领域，抗核小体抗体在临床中对SLE诊断和 治疗 的作用也得到重视。临床研究提示，抗核小体抗体与SLE疾病活动性及狼疮性肾炎的发生明显相关，可能是SLE的特异性抗体之一。 　　2 AnuA(抗核小体抗体,以下简称AnuA)的临床意义 　　2.1 AnuA的定义与回顾 AnuA被定义为与组织蛋白暴露在染色质的部分发生反应的抗体，在染色质内找到的DNA结构，或者一个由天然组织蛋白DNA复合物构成的表位，特别要排除的是抗体与非组织蛋白的反应和隐藏在染色质内的组织蛋白表位的反应，以及与DNA结构如A、C以及Z构型的反应。这些在染色质中均不存在，因此，并不是所有组织蛋白和DNA活性的抗体都具有抗染色质活性。染色质作为ELISA中的抗原最有用的构型是脱H1染色质和核小体核心粒子。在这两种情况下，天然染色质通过微球菌核酸酶消化溶解，H1和非组织蛋白被除去，再用0.5 M生理盐水在中性pH条件下而得染色质。核小体核心粒子由包裹在天然组织蛋白(H2A、H2B、H3、H4)八聚体DNA组成。多元核小体核心粒子，DNA链未被核酸酶切断时，叫做H1修饰染色质。在过去的几年里已经开始重新关注AnuA。AnuA是首批被发现的自身抗体之一，因为它们是组成引起红斑狼疮的细胞排列构造的大多数抗体。许多研究资料［4，5］表明了这种抗体辅助诊断系统性红斑狼疮和药物引起的狼疮(DIL)的临床应用，并且从某种意义上来说，AnuA的定量曾是在临床实验室所进行的最