新型增殖性腺病毒治疗肝癌的实验研究_0.docVIP

新型增殖性腺病毒治疗肝癌的实验研究 【摘要】 目的 构建携带p53基因增殖性腺病毒CNHK600-p53载体， 研究 其对肝癌细胞株抑制效应是否优于Ad-p53。 方法 实验分为两组，单用CNHK600-p53组和单用Ad-p53组；采用四甲基偶氮唑盐（methylthiazolyl tetrazolium assay， MTT），观察两组对肝癌细胞株的杀伤效应。结果 单用CNHK600-p53组较单用Ad-p53组肝癌细胞株细胞抑制率高；但当细胞抑制率达到80%以上时，两组之间差异无显著性，统计 分析 采用率的U检验。结论 较Ad-p53相比携带p53基因的CNHK600-p53能更有效抑制肝癌细胞株，CNHK600-p53可望成为肝癌基因 治疗 的新方法。 　　【关键词】 基因；p53； 肝肿瘤； 基因疗法 　　 The effect of new type replicating adenovirus on the treatment of hepatocarcinoma cell line 　　【Abstract】 Objective To construct a replicating adenovirus vector CNHK600-p53 which carried the anti-tumor gene p53,then investigate its inhibition effect is better than Ad-p53 on hepatocarcinoma cell line.Methods The subject is divided into two groups:single CNHK600-p53 group and single Ad-p53 group. The methylthiazolyl tetrazolium assay （MTT）method was used to observe the killing effect of hepatocarcinoma cell line.Results The single CNHK600-p53 group’s inhibition rate is higher than single Ad-p53 group; But when inhibition rate is about to 80%, there are no difference in two groups. The data are analysed by U test.Conclusion Contrast to Ad-p53, adenovirus CNHK600-p53 is more effective in inhibition to hepatocarcinoma cell line. CNHK600-p53 may be an new gene method for hepatocarcinoma. 　　【Key words】 gene;p53;hepatocarcinoma;gene therapy 　　p53基因是重要的肿瘤抑制基因，与肿瘤的发生、 发展 以及预后关系密切。已证明超过50%以上的肿瘤存在p53基因的异常，且发现p53 基因的突变可能与肿瘤的耐药性密切相关［1］，因而p53基因导入成为重要的肿瘤基因治疗手段，也可能是解决肿瘤耐药性的方法之 一。本实验构建携带p53基因增殖性腺病毒CNHK600-p53载体，研究其对肝癌细胞株抑制效应是否优于Ad-p53。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 293细胞、腺病毒载体pUC19购自加拿大MICROBIX BIOSYSTEMS公司；腺病毒载体pClon17、腺病毒载体CNHK600、腺病毒载体ppE3本室构建；限制性内切酶、胎牛血清、DMEM和Lipofectamine2000试剂盒购自Gibco公司；Taq酶、pfu酶购自MBI公司； T4 DNA连接酶购自PROMEGA公司；琼脂糖、溴化乙锭购自GENE公司；胶回收试剂盒、PCR产物回收试剂盒、质粒DNA制备试剂盒和病毒DNA提取试剂盒购自QIAGEN公司；人肝癌细胞株BEL-7402、人肝癌细胞株QGY-7703购自 中国 科学 院上海细胞生物学研究所，人肝癌细胞株PLC/PRF5、人肝癌细胞株HepG2购自美国ATCC公司；增殖缺陷型腺病毒Ad-p53购自深圳赛百诺公司。 　　1.2 增殖性腺病毒载体 CNHK600-p53构建 设计引物，上游引物：5′-CCG GAA TTC GCC ATG GAG GAG CCG CAG T-3′；下游引物：5′-CGC GGA TCC TTA TCA GTC TGA GTC