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本科生毕业设计（论文） 开题报告 题目:不同盐浓度胁迫对发菜细胞生理生化特征的影响 姓 名：赵芸 班 级：食品112 学 号：201104010219 指导教师：陈雪峰 所在院系：生命科学与工程 一、选题的目的及意义 发菜（Nostoc flagelliforme）是发状念珠蓝细菌的简称，隶属蓝藻门，念珠藻科，念珠藻属，是一种经济价值极高的食用性陆生固氮蓝藻，野生发菜广泛分布于干旱、半干旱地区 。发菜属于光合自养型蓝藻，具有一定的耐盐性和抗渗透胁迫的特性。本课题拟通过对液体培养的发菜细胞进行不同盐浓度胁迫处理，观察发菜细胞生长状况，测定胞外多糖分泌量、海藻糖含量、细胞渗透物质及细胞膜过氧化指标的变化，初步阐明发菜响应盐胁迫过程中的一些基本的生理生化特征的影响变化，从而为发菜资源保护和抗逆机制的研究提供理论依据和数据支持。 二、国内外研究水平和动态 自Berkely cuitis 【1】1857年在北美发现采集标本并定名为Nostoc flagelliforme一百多年来,国外专门立题研究发菜。我国自1972年宁夏农科所(宁夏农林科学院前身)开展发菜生态, 分布及人工培养研究以来,相继有不少单位根据各自的条件分别开展了对发菜的研究【2】。从20世纪70年代以来，我国研究者在发菜的生态和形态【3】、生长条件【4-6】、光合特性【7】等方面做了很多工作，获得了较为丰富的基础研究资料。尤其在国家颁布法律禁止发菜野外采收以后，众多研究者均从野生发菜藻体中分离出发菜细胞，解决了发菜人工培养的菌种问题，并在发菜细胞的人工培养方面做了深入研究。赵学敏等【8】发现BG-11是适合发菜细胞生长的培养基。陈雪峰等【9】通过培养方法对发菜细胞中多糖和蛋白含量影响的研究，结果表明，发菜细胞在液体培养条件下生长速率、胞内水溶性多糖分泌及蛋白质生成最高。 盐胁迫是一个广泛存在的现象，尤其在干旱与半干旱地区，盐胁迫就更为普遍。光合自养的固氮蓝藻通常能表现出一定的耐盐性和抗渗透胁迫的特性。近年来，关于盐胁迫对蓝藻的影响也有了广泛的研究，涉及到盐胁迫对蓝藻的生长、光合作用、固氮作用、细胞??构等多个方面【10】。毕永红【11】等通过对发菜细胞培养物对盐胁迫响应的研究发现，发菜细胞培养物能耐受一定浓度的盐胁迫，而且水溶性多糖分泌量有所增加。贺韵雅【12】等研究了盐胁迫对发菜细胞生理生化特征的影响，研究结果表明，盐胁迫对发菜细胞的正常生长具有一定的抑制作用，盐浓度越高抑制作用越明显。基于贺韵雅的研究成果，作者进一步研究在不同盐浓度胁迫条件下对发菜细胞生理生化特征的影响，以期为发菜资源保护和抗逆机制的研究提供理论依据和数据支持。 三、研究内容 本课题主要从以下几个方面分析对比不同盐浓度胁迫下发菜细胞生理生化特征的变化： 1.不同盐浓度胁迫下发菜细胞生长状况的研究。 2.不同盐浓度胁迫下发菜细胞胞外多糖分泌量与海藻糖含量变化的研究。 3.不同盐浓度胁迫下发菜细胞渗透物质及细胞膜脂过氧化损伤的研究。 四、研究方法 不同盐浓度胁迫下发菜细胞生长状况的研究 发菜细胞形态变化观察： 取正常生长的液体培养的发菜细胞，配成细胞浓度为A410（410nm吸光度）=0.1的悬浮液。将细胞悬浮液以10％的接种量接种于装有200mL培养液的三角瓶中，培养液为BG-11。在光照培养箱中连续培养20天，光照强度60μmol/m2·s,光暗比为12:12（从8:00~20:00,再从20:00~次日8:00），温度白天为25℃、夜晚10℃。 正常条件下培养20天后向培养液中添加氯化钠（NaCI），使培养液中NaCI的浓度分别达到0 mol/L、0.1 mol/L、0.3 mol/L。盐胁迫24h后，无菌操作，用显微镜观察发菜细胞形态，记录细胞形态变化。 1.3.叶绿素a含量测定: 分别吸取3种不同盐浓度胁迫处理的藻悬液各5mL于4000 rpm 离心 10 min,弃上清液，藻体重新悬浮于 5mL 丙酮中，匀浆，于 60℃水浴中加热半小时，后于 4000 rpm 再离心 10 min，得上清液，以丙酮做空白在 663 nm 和处测定吸光度。绘制发菜细胞生长动态曲线，即以时间为横坐标，以叶绿素含量为纵坐标，绘制四种不同盐浓度胁迫下发菜细胞叶绿素含量曲线。 2.不同盐浓度胁迫下发菜细胞胞外多糖分泌量与海藻糖含量变化的研究 2.1.胞外多糖分泌量的测定： 分别吸取3种不同盐浓度胁迫处理的藻悬液各5mL于 5000rpm 离心 10min，取上清液 2mL，然后采用苯酚-硫酸法测定胞外多糖含量。 苯酚-硫酸法：分别取上清液2mL（空白 组为蒸馏水），加入1mL