自噬基因Beclin1在SKOV3细胞中表达及其调控相关信号传导途径研究.pdfVIP

昆明医学院学报 2010 ，（9）：7 ～ 12 CN 53 - 1049/ R Journal of Kunming Medical University 自噬基因Beclin 1 在SKOV3 细胞中的表达及 其调控相关信号传导途径的研究 1） 2） 3） 段振玲 ，王赞宏 ，彭芝兰 （1）昆明医学院第一附属医院妇产科，云南昆明 650032；2)山西医科大学第一临床医学院妇科， 山西太原 030001；3）四川大学华西第二医院妇科，四川成都 610041） ［摘要］目的 探讨自噬基因Beclin 1 在人卵巢癌 SKOV3 细胞中过表达后自噬相关信号调控通路 PI3K/PKB 途径中Class ⅠPI3K （p110α）、p- PKB 和Class ⅢPI3K （hvps34）的表达变化以及对肿瘤细胞的自噬 活性的影响．方法 将自噬基因Beclin 1 的真核表达载体pcDNA3.1/Beclin1 转染SKOV3 细胞；分别用荧光定量 RT- PCR 和Western blot 在mRNA 和蛋白水平检测用流式细胞仪检测Beclin1 、p110α、hvps34 和p- PKB 的表 达；在电镜和荧光显微镜下观察自噬现象，用流式细胞仪检肿瘤细胞自噬情况．结果 pcDNA3.1/Beclin1 转染 后SKOV3 细胞Beclin1 表达在mRNA 和蛋白质水平明显高于转染空质粒pcDNA3.1 和未转染细胞；PcDNA3. 1/Beclin1 转染后hvps34 表达上调，而p110α、p- PKB 的表达下调．PcDNA3.1/Beclin1 转染SKOV3 细胞后在在 电镜下可见大量自噬囊泡形成．在荧光显微镜下见pcDNA3.1/Beclin1 转染后SKOV3 细胞中MDC 阳性细胞明显 增加．流式细胞仪检测pcDNA3.1/Beclin1 转染后SKOV3 细胞MDC 平均荧光强度高于pcDNA3.1 转染组和未转 染组．Beclin 1 在 SKOV3 中的过表达后抑制肿瘤细胞在体外的生长，抑制率为 58.68% ．结论 自噬基因 Beclin1 在人卵巢癌细胞SKOV3 中过表达可使Class ⅢPI3K （hvps34）表达上调，Class ⅠPI3K （p110α）及其 下游的p- PKB 表达下调，诱导肿瘤细胞自噬活性增加，抑制SKOV3 在体外的增殖． ［关键词］Beclin 1 ；自噬；PI3K/PKB；SKOV3 细胞 ［中图分类号］R737.31 ［文献标识码］A ［文章编号］1003－4706 （2010）09 －0007 －06 Expression of Aut ophagy Gene Beclin 1 and Involved Signal Transduct ion Pat hway in Ovarian Carcinoma Cell Line SKOV3 DUAN Zhen －ling 1），WANG Zan －hong 2），PENG Zhi －lan 3） （1）Dept. of Obstetrics and Gynecology ，The 1st Affiliated Hospital of Kunming Medical University ， Kunming Yunnan 650032；2）Dept. of Gynecology ，The 1st Clinical School of Shanxi Medical University ， Taiyuan Shanxi 030001 ；3）Dept. of Gynecology ，The 2nd Hospital of West China ，Sichuan University ， Chengdu Sichuan 610041，China