基因工程-5章基因与载体的连接.pptVIP

人工粘性末端的连接5’突出末端 * * * * 本章重点掌握的内容 概念： DNA体外重组、基因克隆、基因亚克隆、人工接头、定向克隆 DNA体外重组的特点。 载体DNA和目的基因DNA的连接方法。 定向克隆的优点及连接方式。 载体DNA酶切位点具备的条件 如何解决目的基因与载体的连接末端不匹配的连接？ * * * * 第五章 基因与载体的连接 一、概述 二、粘性末端连接法 三、平端连接法 四、人工接头连接法 五、同聚物加尾连接法 * * 一、概述 1、DNA体外重组： 将目的DNA、载体DNA 和DNA连接酶在试管中进行的实验操作过程。 * * 2、DNA体外重组的特点： DNA体外连接减少了DNA分子进入宿主细胞后遭受降解的危险，增加了转化效率。 由于限制性内切酶产生的粘性末端在体外连接，使原来酶的识别序列在整个DNA维持完整性，有利于在重组子转化扩增以后再对外源基因的分离。 连接时可以控制连接反应条件，有利于形成环状分子或者几个DNA片段头尾相连接的直线多联体。 * * 3、基因克隆： 是指将外源基因与有自主复制能力的载体DNA在体外人工连接，构建成新的重组DNA分子的过程，又称为分子克隆。 4、基因亚克隆： 是指将较大的克隆片段经酶切后，再将所有的小DNA片段与另一个载体连接转化的过程。 * * 5、载体DNA酶切位点具备的条件 位于载体上特定的酶切位