不同规模猪场腹泻仔猪大肠杆菌的分离鉴定及药物敏感性检测.pdfVIP

M．椭放鹰廛 2017牟第1期(总第197期) 不同规模猪场腹泻仔猪大肠杆菌的分离鉴定及药物敏感性检测 杨宇 (湖南省长沙市望城区动物疫病预防控制中心，湖南长沙410200) 摘要：从湖南不同地区9个猪场采集腹泻仔猪的肛门拭子，利用麦康凯平板、革兰氏染色镜检和PCR方法共鉴定499株大 肠杆菌。并通过K-B法检测各猪场分离的大肠杆菌对5类抗生素(四环素类、磺胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类、头孢类) 中的9种药物的耐药性。结果显示：各猪场分离的大肠杆菌群体上对头孢噻吩、头孢曲松、恩诺沙星、阿米卡星的耐药 性较低，对氧氟沙星、氟苯尼考、强力霉素、复方新诺明、链霉素的耐药性较高。 关键词：大肠杆菌；分离鉴定；药敏试验 中图分类号：$858．28 文献标识码：A in 仔猪大肠杆菌病(Colibacillosis piglets)是危 害仔猪健康较严重的细菌传染病之一，给养猪业带 来较严重的经济损失【l】。为掌握湖南省致仔猪腹泻 大肠杆菌的耐药性流行情况，本试验选取湖南省部 PCR鉴定。 分地区的9个规模猪场，采集腹泻仔猪的直肠肛门 1．2．3药物敏感性检测 试子，共分离鉴定出499株腹泻仔猪源大肠杆菌。 根据各抗生素的抗菌谱选择头孢噻肟、头孢曲 经药物敏感性试验，分析各猪场大肠杆菌的药物敏 松、恩诺沙星、氧氟沙星、氟苯尼考、强力霉素、复方 感性，为临床上用药提供科学的参考依据。 新诺明、阿米卡星和链霉素9种药敏纸片，按K—B 1材料与方法 法进行药物敏感性检测。 1．1材料 2结果 麦康凯培养基、抗菌药物药敏纸片购自杭州微 2．1采样猪群的临床资料 生物试剂有限公司；革兰氏染色试剂盒，购自北京 选择湖南省的泪罗市等地9个规模猪场，采集 索莱宝科技有限公司；即用型PCR试剂盒3．0，购疑似有大肠杆菌病腹泻仔猪的直肠肛门拭子，并根 自TIANZ公司。 据各猪场仔猪腹泻的发病情况，采集有腹泻症状的 1．2方法 仔猪直肠肛门拭子，保存于装有灭菌PBS的1．5mL 1．2．1采样猪群的选择 的离心管中，将样品带回实验室。 从湖南省不同地区选取9个规模猪场，采集临 2．2细菌分离鉴定结果 床上有腹泻表现仔猪的肛门拭子适量。 采集的腹泻仔猪肛门拭子，接种于麦康凯平板 1．2．2细菌的分离与鉴定 划线培养，见每份样品中都有若干的红色单菌落。 在无菌条件下，将采集的直肠肛门拭子样品划 将已纯化的菌落进行涂片和革兰氏染色镜检，观察 线接种于麦康凯平板，37℃下培养18～20h。从每 到分离菌为革兰氏阴性的小杆菌，且形态很单纯， 份样品的麦康凯平板上挑取3．4个大肠杆菌疑似 代表性镜检涂片见图1。 菌落，在血琼脂平板上划线纯化。 使用大肠杆菌特异性引物PCR扩增鉴定分离 涂片革兰氏染色镜检：无菌挑取经纯化疑似大 的大肠杆菌可疑菌株，并进行0．9％的琼脂糖电泳 肠杆菌的菌落与洁净玻片上的无菌水混合，涂布均 胶，采集信号，可疑菌株均能扩增到约264bp的特 匀，经自然干燥后火焰固定。按革兰氏染色试剂盒 异性条带，部分检测结果见图2。 说明书染色镜检。 2．3药物敏感性结果 PCR鉴定：根据文献[21设计检测大肠杆菌的特 为了解决临床生产中的问题，以各猪场为组将 异性引物，目的片段大小为264bp，