第10讲-生物信息传递上3.pptVIP

3. 4 转录的终止和抗终止3.5 RNA Pol I和Pol III介导的基因转录（了解）3. 6 内含子的剪接、编辑及化学修饰（初步了解） 3. 4 转录的终止和抗终止 RNA聚合酶启始基因转录后，就沿模板5’→3’方向不停地移动，合成RNA链直到碰上终止信号时才与模板DNA相脱离并释放新生RNA链。所有参与形成RNA-DNA杂合体的氢键都被破坏，模板DNA链与有意义链重新组合成DNA双链。 3. 4. 1 不依赖于ρ因子的终止 终止位点上游一般有一个富含GC碱基的二重对称区，由这段DNA转录产生的RNA容易形成发卡式结构。在终止位点前面有一段由4-8个A组成的序列，所以转录产物的3’端为寡聚U，这种结构特征的存在决定了转录的终止。 新生RNA中出现发卡式结构会导致RNA聚合酶的暂停，破坏RNA-DNA杂合链5’端的正常结构。寡聚U的存在使杂合链的3’端部分出现不稳定的rU?dA区域，两者共同作用使RNA从三元复合物中解离出来。 终止效率与二重对称序列和寡聚U的长短有关，随着发卡式结构（至少6bp）和寡聚U序列（至少4个U）长度的增加，终止效率逐步提高。 3. 4. 2 依赖于ρ因子的终止 提纯的RNA聚合酶并不能识别特异性的转录终止信号，而加入大肠杆菌ρ因子后该聚合酶就能在DNA模板上准确地终止转录。ρ因子是一个相对分子质量为2.0×105的六聚体蛋白，它通过催化NTP的水解促使新生RNA链从三元转录复合物中解离。 RNA合成起始以后，ρ因子即附着在新生的RNA链上，靠ATP水解产生的能量，沿着5’→3’方向朝RNA聚合酶移动，到达RNA的3’-OH端后取代了暂停在终止位点上的RNA聚合酶，使之从模板DNA上释放mRNA，完成转录过程。 3.5 RNA Pol I和Pol III介导的基因转录 RNA Pol I 只用于合成pre-rRNA．有三大特征： 1. pre-rRNA组成一个长的转录单元； 2. 真核生物基因组上rDNA区中成熟rRNA基因相对位置和方向永远相同（５’－＞18Ｓ，5.8 S和28 S－＞３’)； 3.无论原核还是真核生物中，pre-rRNA转录单元都显著长于成熟rRNA的总和． 3. 6 内含子的剪接、编辑及化学修饰 3. 6. 1 RNA中的内含子 因为真核基因表达往往伴随着RNA的剪接过程（splicing），从mRNA前体分子中切除被称为内含子（intron）的非编码区，并使基因中被称为外显子（exon）的编码区拼接形成成熟mRNA。 真核基因大多是断裂的，也就是说，一个基因可由多个内含子和外显子间隔排列而成。研究表明，内含子在真核基因中所占的比例很高，甚至超过99%（表3-7）。 由DNA转录生成的原始转录产物——核不均一RNA（hnRNA, heterogeneous nuclear RNA），即mRNA的前体，经过5’加“帽”和3’酶切加多聚腺苷酸，再经过RNA的剪接，编码蛋白质的外显子部分就连接成为一个连续的可译框（open reading frame，ORF），通过核孔进入细胞质，作为蛋白质合成的模板。 真核基因平均含有8-10个内含子，前体分子一般比成熟mRNA大4-10倍。 内含子的“功能”及其在生物进化中的地位是一个引人注目的问题。 许多人类疾病是内含子剪接异常引起的。地中海贫血病人的珠蛋白基因中，大约有1/4的核苷酸突变发生在内含子的5’或3’边界保守序列上，或者直接干扰了前体mRNA的正常剪接。 表3-9总结了存在于生物体内的各种内含子，其中GU-AG或AU-AC分别代表了不同内含子的5’和3’边界序列。 除了边界序列之外，外显子与内含子交界处的序列，内含子内部的部分序列都有可能参与内含子的剪接（图3-22）。 3. 6. 2 RNA的剪接 转录产生的核内mRNA前体分子与蛋白质结合，形成RNA和蛋白质组成的RNP复合物（ribonucleo-protein particle）。随着RNA链的延伸，每个内含子5’和3’两端的复合物成对联结，产生60S的颗粒—剪接体（spliceosome），进行RNA前体分子的剪接。 与mRNA前体中主要（GU-AG类）和次要（AU-AC类）内含子的剪接方式不同的是I、II类内含子，因为带有这些内含子的RNA本身具有催化活性，能进行内含子的自我剪接。 在I类内含子切除体系中，鸟苷或鸟苷酸的3’-OH作为亲核基团攻击内含子5’端的磷酸二酯键，从上游切开RNA链。再由上游外显子的自由3’-OH作为亲核基团攻击内含子3’位核苷酸上的磷酸二酯键，使内含子被完全切开，上下游两个外显子通过新的磷酸二酯键相连。 在II类内含子切除体系中，内含子本身的某个腺苷酸2’-OH作为亲核基团攻击内含子5’端的磷