第六章克隆基因的表达2.pptVIP

Thank you Gene engineering 一、遗传检测法 遗传检测法可分为根据载体表型特征和根据插入序列的表型特征选择重组子两种方法。 1．根据载体表型特征选择重组体分子的直接选择法 在基因工程中使用的所有的载体分子，都带有一个可选择的遗传标记或表型特征。质粒以及柯斯载体具有抗药性标记或营养标记，而对于噬菌体来说，噬菌斑的形成则是它们的自我选择特征。 (1) 抗药性标记插入失活选择法 pBR322质粒是DNA分子克隆中最常用的一种载体分子。编码有四环素抗性基因(tetr)和氨苄青霉素抗性基因(ampr)。只要将转化的细胞培养在含有四环素或氨苄青霉素的生长培养基中，便可以容易地检测出获得了此种质粒的转化子细胞。 重组菌 非重组菌 非重组菌 不含有抗菌素的 培养基 含有抗菌素的 培养基 含有抗菌素的 培养基 (2) β—半乳糖苷酶显色反应选择法 外源DNA插入到它的lacZ基因上所造成的β-半乳糖苷酶失活效应，可以通过大肠杆菌转化子菌落在X-gal-IPTG培养基中的颜色变化直接观察出来。在pUC质粒载体lacZ序列中，含有一系列不同限制酶的单一识别位点，其中任何一个位点插入了外源克隆DNA片段，都会阻断读码结构，使其编码的肽失去活性，结果产生出白色的菌落。 2．根据插入序列的表型