第六章核酸分子杂交-2005-4-LXG.pptVIP

用一已知的DNA或RNA片段(探针)来检测样品中未知的核苷酸序列，通过核苷酸间碱基互补的原理互相结合，再经显影或显色的方法，将结合核苷酸序列的位置和大小显示出来。 核酸分子杂交的基本原理 核酸分子杂交应用 基因克隆的筛选 酶切图谱的制作 基因组中特定基因序列的定量和定性分析 基因突变分析 疾病的诊断 第一节 核酸探针及其标记 寡核苷酸探针 基因组DNA探针 cDNA探针 RNA探针 高度灵敏性 标记物与核酸探针分子的结合，不影响探针的主要理化特性，绝对不能影响其碱基对特异性 具有较高的化学稳定性，能耐较高温度和保存时间 检测方法具有高度特异性 标记及检测方法简单 对环境无污染，对人体无损伤 价格低廉 灵敏度极高 放射性核素对各种酶促反应无任何影响,也不会影响碱基配对的特异性与稳定性和杂交性质 极高的特异性 无放射性污染 稳定性好,可较长时间存放 生物素化核苷酸的制备:酶法(U)与化学法(C) 生物素标记方法:参入标记法(随机引物法或缺口翻译法)与光敏生物素标记法 生物素探针的检测体系 探针DNA标记:Dig+dUTP→ Dig-dUTP Dig-dUTP标记DNA方法: 切口平移法与随机引物标记法 检测方法: Dig-DNA探针+抗Dig抗体-ALP或HRP+底物（BCIP+NBT） 二、核酸探针的标记方法 1. DNA的切口平移标记法