第八章位点特异性重组与DNA的转座.pptVIP

第八章 位点特异性重组与DNA的转座 1. 保守性位点特异性重组 2. 位点特异性重组的生物学作用 3. 转座 4. 转座子及其调控 一、保守性位点特异性重组（CSSR） 1. 位点特异性重组发生在目标DNA上的特异序列中。 ? 2. 位点特异性重组酶利用共价蛋白-DNA中间体切割分离与连接DNA。 --位点特异性重组酶有两个家族：丝氨酸重组酶与酪氨酸重组酶。 二、位点特异性重组的生物学作用 细胞与病毒用位点特异性重组可实现各种各样的生物学功能。 --噬菌体利用重组机制在感染时将本身DNA嵌入到宿主染色体中。 --位点特异性重组可用于改变基因表达。 --位点特异性重组还广泛用于DNA复制、同源重组和细胞分裂周期中保持环状DNA分子的结构完整。 转座因子的发现 B. McClintock的玉米遗传研究 1951年，B.McClintock根据长期对玉米的遗传研究，提出了转座（transposition）的概念，提出基因可以移动的新观点。 Shapiro的E.coli半乳糖操纵子研究 ◆ 半乳糖操纵子—— galK基因编码半乳糖激酶； galT基因编码半乳糖尿苷酰转移酶； galE基因编码半乳糖异构酶。  原核生物转座因子 类型 （1）插入序列（insertion sequence ,IS） ◆ E.coli K12中有IS1, IS2, IS3, IS4, IS5。 E.coli的F因子中有IS2, IS3(4个),γ，δ。 ◆ 末端的序列相同或相近，但方向相反，称为反向重复序列（IR），与其相连的宿主DNA末端会产生正向重复序列（DR）。 ◆ 仅编码与转座有关的转座酶，转座酶交错切割宿主DNA，然后IS插入，IS两端形成DR。 ? ? （2）复合转座子（composite transposon） ◆ 两端由IS元件组成，元件相同或不相同，方向相同或不相同；两端元件都有功能或仅一侧元件有功能。 ◆ 中心区域编码抗性标记，不同复合转座子的抗性标记不同，例如Kanr 、Camr 、Strr 、Bler 等。 ◆ 两个IS元件能够使它们之间的DNA序列转座。 ? 真核生物转座因子 玉米的转座因子 （1） McClintock的发现 玉米的红色花青素合成受多基因控制，使胚乳呈紫色。其中任一基因突变都使色素合成受阻，胚乳变白。如果发生回复突变，会导致斑点产生。McClintock发现，色素基因C突变是由“可移动的控制因子”引起的，称为解离因子（dissociator ,Ds），它可插入C基因中。另一可移动的控制因子是激活因子（activator,Ac），Ac能激活Ds转入C基因，也能使Ds从C中转出，这就是Ac-Ds系统。 （2）玉米的控制因子家族 McClintock还发现了Spm-Dspm系统。每个家族都有自主性因子和非自主性因子。 ◆ 自主性因子有切离和转座能力。可插入任何位点产生不稳定的或可“突变”（mutable）等位基因。自主性因子的丢失，可使可变的等位基因变成稳定的等位基因。 ◆ 非自主性因子是稳定的，自身不能转座，来源于失去反式作用功能的自主因子，而这种功能是转座所必须的。 ◆ 控制因子家族是通过这两种因子相互作用来划定的。一个家族由单个类型的自主因子组成，这些因子由很多种非自主因子相伴随。 ◆ 玉米Ac-Ds系统的结构 ☉Ac序列由含5个内含子的单个基因编码，其产物为转座酶，末端有11bp的IR和8bp的DR。 ☉Ds是由Ac缺失产生的，Ds9缺失194bp；Ds6只保留2Kb。转座酶失活但保留完整的转座酶作用位点（包括末端）。 ☉ Ac-Ds属于非复制型转座，发生转座后，它们从供体位置上消失。 果蝇的P因子 （1）果蝇的“杂种不育”品系 某些果蝇品系杂种后代现一系列缺陷，在P-M系统的杂交中，子一代具有正常的体细胞组织，但性腺不能发育。 P(♂) × P(♀) — F1 正常能育 M(♂) ×M(♀) — F1 正常能育 M(♂) ×P(♀) — F1 正常能育 P(♂) ×M(♀) — F1 不育 （2）P 因子 ◆研究发现，杂种不育是由于在W位点插入P因子（P element）所致，P品系有P因子，M品系无P因子。 ◆P因子长2.9 Kb ，有4个开放阅读框(ORF)，末端有31bp反向重复序列，靶DNA产生8bp的正向重复序列。 ◆一个P品系果蝇带