第二部分-中药指纹图谱研究方法学.pptVIP

第二部分  中药HPLC指纹图谱研究方法学 内容简介 2.1 常用的指纹图谱研究方法与技术 2.2 HPLC仪器及工作原理 2.3 HPLC仪器与使用中的若干问题 2.1 常用的指纹图谱研究方法与技术 中药指纹图谱研究所采用的方法大致分为：色谱法、光谱法及其它。 色谱法包括：薄层色谱法（TLC）、液相色谱法（LC）、气相色谱法（GC）、高效毛细管电泳法（CE）； 光谱法包括：紫外光谱法（UV）、红外光谱法（IR）、近红外光谱法（NIR）； 其它方法：X射线衍射法（X-Ray）、核磁共振法（NMR）、气质连用（GC-MS）、液质联用（LC-MS、LC-MS-MS）等。 2.1.1 X射线衍射法及核磁共振法 这两种方法能给出药效物质基础的结构信息，部分信息也可能与特定化学成分直接关联。但该两种方法所使用的仪器在国内尚未普及，不适应该方法的应用与推广。在中药指纹图谱研究过程中不建议采用X射线衍射法及核磁共振法。 2.1.2 紫外可见分光光度法 红外光谱法 这两种方法能够给出药效物质基础的结构信息，但所给出的信息是所有化学物质结构结构信息的加和，不具备指纹特征，但可作为中药指纹图谱研究的辅助方法。 2.1.3 近红外光谱法 此方法与红外光谱法原理相同，但检测时采用近红外波长，所给出的信息是所有化学物质结构信息的加和，通过一系列样本的检测（必须预先知道样品中相关成分的含量或样本的定性归属），运用化学计量学手段，建立了样本与信息之间的数学模型。运用该模型即可对未知样本（如：新近购进的原药材或新生产的成品等）进行辨别分析（给出结果：合格与否、含量多少等）。 优点：检测速度快（通常为1 min）、操作简单、适宜过程控制等。 数据处理需掌握一定的化学计量学知识。 近红外技术在农药、化工、农业等相关领域已广泛应用，方法的成熟度较高，在中药质量控制方面有较好的应用前景，可大力推广近红外技术在原材料质量控制中的应用。 2.1.4 薄层色谱法 薄层色谱法为传统的定性、定量分析方法，广泛应用于道地药材的定性鉴定。 2000版《中国药典》，采用薄层色谱法进行定性鉴别，列于【鉴别】项下；采用薄层扫描法进行含量测定，列于【含量测定】项下。 优点：操作简单、分析速度快、一次分析样品数量多。 缺点：重现性、精密度差。 可作为中药指纹图谱研究的借鉴与补充。 2.1.5 液相色谱法 最常用的指纹图谱研究方法，其中高效液相色谱法（HPLC）具有分离效能高、选择性高、检测灵敏高、分析速度快、应用范围广等特点。 中药样品中含有的成分绝大多数可在高效液相色谱仪上进行分析检测，方法成熟，中药指纹图谱研究应优先考虑高效液相色谱法。 2.1.6气相色谱法 气相色谱法主要用于分析气体、挥发性和半挥发性液体以及能够产生足够蒸气压的固体，或者沸点在500℃以下，相对分子质量400以下的物质。 在中药质量控制中主要用于挥发油、极性较小的成分或衍生化后的可挥发性成分（如脂肪酸的酯）。 特点：灵敏度高、分离度好、分析速度快，定量分析的精密度优于1%，但分析范围只局限于低沸点成分是其主要不足。为中药指纹图谱研究的主要方法之一。 2.1.7 高效毛细管电泳法 高效毛细管电泳法是以毛细管为分离通道、以高压直流电场为驱动力的新型分离分析技术。适用于中药中带电荷的化合物（蛋白质、氨基酸、黄酮、生物碱）、有机酸、单糖及一些中性分子的分离分析，可作为中药指纹图谱研究的补充。 2.1.8 其它方法 高效液相色谱与质谱联用（HPLC-MS）、气相色谱与质谱联用（GC-MS）、毛细管电泳与质谱联用（CE-MS）等。 这些方法可在指纹图谱中的部分色谱峰在无标准物质验证的情况下，起到定性鉴别的作用。 最常用为：TLC、HPLC、GC。 2.2 HPLC仪器及工作原理 2.2.1 HPLC工作原理 2.2.2 不同型号HPLC仪器简介 2.2.3 HPLC仪器组件功能 2.2.1 HPLC工作原理 2.2.2 不同型号HPLC色谱仪 岛津 shimadzu LC-6AD HPLC 2.2.3 HPLC仪器组件功能 试剂槽（袈） 进样装置 功能：将溶液状态样品引入HPLC系统 流路中为高压力工作状态，通常使用耐高压的六通阀进样装置 高压泵输液 功能：以稳定的流速和压力输送流动相 由于色谱柱固定相（C18, silica gel)粒度较小(5u,10u)，系统将在高压下运行 梯度淋洗装置 高压梯度: 利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。 低压梯度: 一台高压泵, 通过比例调