第二章细胞培养及培养细胞的生物学特点.pptVIP

（一）体外细胞培养物的生长类型 按生长方式分为两种类型 贴附型细胞:附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。 悬浮型细胞:不必附着于固相支持物表面，而在悬浮状态下 即可生长的细胞。 绝大多数有机体细胞属粘附型细胞，只有少数细胞类 型如某些肿瘤细胞和白细胞可在悬浮状态下生长。 2、悬浮生长型 概念 培养时不贴附于底物而呈悬浮状态生长或以机械方法使保持悬浮状态下生长 来源 自血，脾或骨髓，尤以血中白细胞。癌、肿细胞也可能 特点 在悬浮中生长良好，细胞圆形，单个或小细胞团 五、体外培养细胞的遗传学特征 （一）染色质和染色体： 人体体细胞具有二倍体核型，染色体数目为46（2N）。原代培养细胞多呈二倍体，经传代成细胞系后，细胞可保持二倍体状态。但经长期传代可能发生偏离二倍体现象，即染色体数多于或少于46。当细胞发生转化或肿瘤细胞，大多失去二倍体核型，成为多倍体或异倍体。在各类培养细胞中，有时会见到异常的染色体，如双着丝点、环形染色体，长臂或短臂 （3）游走细胞型 细胞质常伸出伪足或突起，呈活跃的游走或变形运动， 贴附于支持物上散在生长，一般不连接成片。该类细胞形状很不稳定，有时与上皮样细胞 或成纤维细胞难以区别。单核细胞、巨噬细胞及某些肿瘤细胞在体外培养时常呈现此种形态。 （4）多形型细胞 生长时像神经细胞那样呈多角形，并伸出较长的神经纤维，很难确定它们的形状，因而我们将此类细胞称为多形型细胞。体外培养时常见的多形型细胞是神经元和神经胶质细胞。 优点 生存空间大，提供数量大 传代方便(不需消化) 易于收获 可获得稳定状态 缺点 观察不方便 很多细胞不能悬浮生长(尤以正常细胞) 三、培养细胞的生长特点 （一）贴附 （二）接触抑制 （三）密度抑制 四、培养细胞的生长和增殖过程 （一）单个细胞的生长过程 （二）培养细胞生命期 (Life Span of Culture Cells) 所谓培养细胞生命期，是指细胞在培养中持续增殖和生长的时间。包括原代培养期、传代培养期及衰退期。 正常培养的细胞周期 原代培养(Primary Culture)期 也称初代培养，即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段，一般持续1-4周。 特点：细胞呈活跃移动，可见细胞分裂，但不旺盛。与 体内原组织在形态结构和功能活动上相似性大。 特点：在全生命期中此期的持续时间最长，细胞增殖旺 盛，并能维持二倍体核型。 传代期： 传代：体内细胞生长在动态平衡环境中，而组织培养细胞的生存环境是培养瓶、皿或其它容器，生存空间和营养是有限的。当细胞增殖达到一定密度后，则需要分离出一部分细胞和更新营养液，否则将影响细胞的继续生存，这一过程叫传代。初代培养的细胞一经传代后便改称做细胞系。 衰退期： 特点：此期细胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖，最后衰退凋亡。 （三）体外培养细胞一代生存期 潜伏期 指数增生期 停止期 所谓细胞的“一代”是指从细胞接种到分离再培养的一段时间。 潜伏期：包括悬浮期及潜伏期。当细胞接种入新的培养器皿，不论是何种细胞类型、其原来的形态如何，此时细胞的胞质回缩，胞体均呈圆球形。先悬浮于培养液中，短时间后，那些尚可能存活的细胞，即开始附着于底物，并逐渐伸展，恢复其原来的形态。再经过一潜伏期，此时细胞已存活，具有代谢及运动但尚无增殖发生。以后出现细胞分裂并逐渐增多而进入指数生长期。 指数增生期：又称对数期。此期细胞增殖旺盛，成倍增长，活力最佳，适用于进行实验研究。细胞生长增殖状况可以细胞倍增情况（细胞群体倍增时间）及细胞分裂指数等来判断。在此阶段，若细胞处于理想的培养条件，将不断生长繁殖，细胞数量日渐增加。细胞将接触而连成一片，渐次长满培养器皿底面，提供细胞生长的区域逐渐减少甚至消失。因接触抑制而细胞运动停止、密度抑制而细胞终止分裂。 停止期： 又称平台期，此期可供细胞生长的底物面积已被生长的细胞所占满，细胞虽尚有活力但已不再分裂增殖。此时细胞虽已停止生长，但仍存在代谢活动并可继续存活一定的进间。若及时分离培养、进行传代，将细胞分开接种到新的培养器皿并补充以新鲜培养液，细胞将于新的培养器皿中成为下代的细胞而再次繁殖。否则，若传代不及时，细胞将因中毒而发生改变，甚至脱落、死亡。 每次传代接种后，细胞的这些生长繁殖过程，若进行检测计数，可以