第二章基因工程与食品产业一.pptVIP

第二章基因工程与食品产业（一） 二、基因工程的定义、意义及研究内容 （一）基因工程的定义 基因工程又叫基因拼接技术或DNA重组技术。该技术是在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的基因产物。 （二）基因工程的意义 基因工程是现代生物工程的主体核心技术。基因工程的最大特点是可打破生物种属界限，进行生物种(属、科、目、纲、门、界)内外基因的重组、遗传信息的转移。 遗传病、心脑血管病、糖尿病、癌症过度肥胖综合症、老年痴呆症、骨质疏松症 三、自然界的基因转移与重组 　接合作用(conjugation) 　转化(transformation) 　转导 (transduction) 转染(transfection) 　　 *转染(transfection) 转染是转化的一种特殊形式。 由transformation（转化）和 infection（感染）两词构成。 原指将噬菌体、病毒或以其为载体构建的重组子导入受体细胞的过程。 通过感染方式将外来DNA引入宿主细胞，并导致宿主细胞遗传性状改变的过程称为转染。 将任何类型DNA转移至动物细胞内的过程均可叫转染。 四、基因工程技术包括下列过程 分—获取目的基因和载体 接—目的基因与载体的连接 转—重组DNA导入宿主细胞 筛—重组DNA的筛选 鉴—重组DNA的鉴定 可用以上五个字表示 目的基因的制备 1）化学合成法 根据已知多肽链的氨基酸顺序，利用遗传密码表推定其核苷酸顺序再进行人工合成。适应于合成小分子多肽的基因 全基因合成：合成40-60bp片段，再连接 合成思路 基因的半合成：合成末端间有10-14bp个互补碱基的 片段，再利用DNA聚合酶催化合成 目前，常用DNA自动合成仪合成。 3、cDNA文库法 cDNA文库(cDNA library)：是指汇集以某生物成熟mRNA为模板逆转录而成的cDNA序列的重组DNA群体 操作流程：提取出组织细胞的全部mRNA，在体外反转录成cDNA，与适当的载体，常用噬菌体或质粒载体连接后转化受体菌，则每个细菌含有一段cDNA，并能繁殖扩增，这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合就形成了该组织细胞的cDNA文库。 实际为不包含内含子的基因组文库。 需要克隆的DNA片段 化学合成法 cDNA文库 基因组DNA文库 聚合酶链式反应 化学合成方法 制备方法 生物制备法 2、基因组文库（Genomic DNA Library） 基因组文库(gene library)：是指汇集某一基因组所有DNA序列的重组DNA群体 从生物组织细胞提取出基因组DNA ，用限制性酶法将DNA降解成预期大小的片段，并电泳分离，然后将这些片段与适当的载体（噬菌体）体外重组，进行体外包装系统将重组体包装成完整颗粒，转入受体细菌（大肠杆菌），形成大量噬菌斑，从而形成整个基因组DNA的重组DNA克隆群体，称为基因组DNA文库。 具备了基因组文库，就可以用目的基因片段作探针，利用菌落原位杂交技术，从大量的菌落中筛选出含有目的基因的重组体的菌落，再经过扩增，提取其中的重组体，最后即可获得所需要的目的基因片段。 基因组DNA文库法示意图 Digest with restriction enzyme Genome DNA DNA recombination Transformation Packaging and assembly Genome DNA * * 一.基因工程概述 　　基因工程的诞生　基因工程是一项新兴的工程技术，它的诞生需要理论和技术上的支持： ? 1. 理论上的三大发现： ????? 证明了生物的遗传物质是DNA或ＲＮＡ（基因工程的先导） ????? DNA的双螺旋结构和半保留复制机理 ????? 遗传信息的传递方式（中心法则）和三联体密码子系统的建立 ? 2. 技术上的三大发现 ????? 限制性内切酶和DNA连接酶的发现（标志着DNA重组时代的开始） ????? 载体的使用 ????? 1970年，逆转录酶的发现。 ???? 1973年，Cohen等