第九章基因工程新技术与应用.pptVIP

细胞遗传学 细胞遗传学 细胞遗传学 * * 第十四章 基因工程新技术与应用 第一节 分子标记技术和应用 从孟德尔用豌豆（Pisumsativum）的形态性状为最初的遗传标记开始，也经历了形态标记（Morphological marker）、细胞标记（cytological marker）、生化标记（biochemical marker）和分子标记（molecular marker）四个主要的阶段。 一、分子标记概念的界定 1、分子标记概念的界定 广义的分子标记（molecular marker）是指可遗传的并可检测的DNA序列或蛋白质。狭义的分子标记概念只是指DNA标记，而这个界定现在被广泛采纳。 2、理想的分子标记的界定 3、分子标记的优点 （1）可随时检测，不受限制； （2）数量极多，遍布整个基因组； （3）多态性好且许多标记为共显性，信息完整。 二、DNA分子标记的类型 大致可分为三类：第一类是以电泳技术和分子杂交技术为核心的分子标记技术，包括限制性片段长度多态性（RFLP）、可变数目串连重复位点（VN-TRS）多态性分析、mRNA差别显示技术（DDRT-PCR）；第二类是以电泳技术和PCR技术为核心的分子标记，包括随机扩增多态DNA（RAPD）、简单重复序列（SSR）、（AFLP）。第三类是以DNA序列为核心的分子标记。其代表性技术有ITS（internal transcribed spacer）测序技术。 1、分子杂交为基础的分子标记 限制性片段长度多态性 （Restriction fragment length Polymorphism RFLP） RFLPs （high resolution restriction fragment length polymorphism） 可变数目串联重复序列 （Variable Number Tanden Repeat，VNTR）， 也称DNA指纹 （Fingerprinting） 2、以PCR为基础的分子标记 以随机扩增多态DNA （Random amplified polymorphic DNA，RAPD）为代表的单引物系统分析 ： ①随机扩增多态DNA ②DNA扩增指纹（DNA amplification fingerprinting，DAF） ③绝对引物的PCR（arbirtraty primed-PCR，AP-PCR） ④单引物扩增反应（The single primer a mplification reaction，SPAR）。 由两个引物引起的选择性扩增片段长度多态性（AFLP）分析。 以简单重复序列Simple Sequence Repeat（SSR）为代表的两个引物的PCR标记系统 。 DNA单链构象多态性（SSCP）分析 。 单核苷酸多态性（single nucleotide poly morphism，SNP）技术。 DGGE/TGGE（变性梯度凝胶电泳/温度梯度凝胶电泳）。 同工酶分子标记 3、标记系统在育种中的选择应用 要根据每种标记的特点、项目的目标、群体结构以及现有的条件等进行选择。一般在选择时考虑以下几个因素： 标记的显性类型与群体 实验室的现有条件 种属的多态性 不同系统的重复性（稳定性） 成本与所花费的时间 三、分子标记的应用 品种或品系遗传纯度的测定及遗传关系确定 1、分子标记遗传图谱的构建和基因定位 分子标记对质量性状的基因定位 数量性状基因位点（QTL）分子标记对定位的研究 2、分子标记辅助选择 3、比较基因组的分析 4、分子标记应用于种质鉴定的研究 良种登记、系谱记录的建立及亲缘关系鉴定 第二节 基因芯片技术和应用 一、概念 基因芯片是指采用原位合成或直接点样的方法将大量DNA片段或寡核苷酸片段以预先设计的方式排列在硅片、玻