第七章微生物的分类命名及鉴定.pptVIP

D 羊膜腔接种 主要用于正粘病毒和副粘病毒的分离和增殖，为11-12日龄鸡胚。 羊膜腔接种 （3）组织培养 组织培养是分离培养病毒及进行病毒实验研究简便而有效的工具和手段。近年来,许多新的动物病毒就是通过组织培养方法而发现的,组织培养也用于生产病毒抗原及制备病毒疫苗。 ① 组织块培养 就是将动物组织切成小块在固定或悬浮状态下培养。是最早的组织培养方法。 ② 器官培养 取器官薄片（如一小段器官或一小块鼻粘摸）进行培养，如某些呼吸道病毒就是应用器官培养才分离出来的。 （4）细胞培养 细胞培养在病毒学方面的研究最为广泛，除用作病毒的病原分离外，还可研究病毒的繁殖过程及其细胞的敏感性和传染性（细胞的病理变化及包涵体的形成）。观察病毒传染时细胞新陈代谢的改变，探讨抗体与抗病毒物质对病毒的作用方式与机制，以及研究病毒干扰现象的本质和变异的规律性，可用于病毒的分离鉴定、抗原的制备及疫苗、干扰素的生产、病毒性疾病诊断和流行病学调查等。近年来，也用于繁殖病毒载体以用于基因治疗。 3、病毒的鉴定 形态学鉴定-电镜技术 包涵体检查 生物学特性鉴定 病毒理化特性的测定 血清学鉴定 分子生物学方法鉴定 细胞病变效应 血吸附和血凝作用 干扰作用 核酸类型的鉴定 颗粒大小的测定 对酸的敏感性 对脂溶剂的敏感性 免疫荧光抗体技术 酶联免疫吸附试验（ELISA） 金标抗体技术 核酸分子杂交技术 PCR技术 核酸序列分析技术 血凝抑制试验等 可直接取病料或感染培养物作成电镜标本后染色用电子显微镜进行检查，电子显微镜检查不仅可以看到病毒粒子的存在，而且可以根据病毒粒子的形态及其在细胞内的位置，而大致判定其属于哪一个病毒科(属)。常用电镜技术有负染法和超薄切片法。电子显微镜检查是快速可靠的方法。 电镜技术是检测不能在体外培养的病毒的主要手段，也是病毒分类的重要手段。如轮状病毒、星状病毒、嵌杯状病毒、甲型肝炎病毒等都是用电镜最先发现的。因此，在诊断病毒学方面，应用电镜技术将能进一步发现新的病毒和病毒病。 （1）形态学检查-电镜技术 在某种意义上说，包涵体是某些病毒对一定的机体或细胞的病理学特征，这种特征具有一定的种属性。在不同的病毒感染中往往具有独自的形态、染色特性和存在部位。有些病毒病出现包涵体，从包涵体的检出可以帮助诊断疾病。病理组织或渗出液作成涂片检查包涵体时，常用苏木精—伊红染色法，也可用姬姆萨、MM氏等其他染色法。包涵体多数呈嗜酸性，也有嗜碱性者，但是不能过分强调这种染色特征，因为包涵体的不同发育阶段对pH值的反应有差异。 （2）检查包涵体 还可通过鉴定病毒的生物学特性来鉴定病毒。 ① 细胞病变作用(Cytopathogenic effect,CPE) 病毒在细胞内增殖引起细胞退形性变化，表现为细胞皱缩、变圆、出现空泡、死亡和脱落。某些病毒产生特征性CPE，普通光学倒置显微镜下可观察上述细胞病变，结合临床表现可做出预测性诊断。免疫荧光（IF）法用于鉴定病毒具有快速、特异的优点，细胞内的病毒或抗原可被荧光素标记的特异性抗体着色，在荧光显微镜下可见斑点状黄绿色荧光，根据所用抗体的特异性判断为何种病毒感染。② 红细胞吸附现象（Hemadsorption phenomenon） 流感病毒和某些副黏病毒感染细胞后24～48小时，以细胞膜上出现病毒的血凝素，能吸附豚鼠、鸡等动物及人的红细胞，发生红细胞吸附现象。若加入相应的抗血清，可中和病毒血凝素、抑制红细胞吸附现象的发生，称为红细胞吸附抑制试验。这一现象不仅可作为这类病毒增殖的指征，还可作为初步鉴定。③ 干扰现象 (Interference phenomenon) 一种病毒感染细胞后可以干扰另一种病毒在该细胞中的增殖，这种现象叫干扰现象。 （3）生物学特性鉴定 * * 郑州牧专动物医药系微生物教研室 第七章 微生物的分类命名及鉴定 主要内容: 细菌的分类与命名 病毒的分类与命名 细菌分离鉴定 病毒分离鉴定 (一) 分类地位 细菌过去归属植物界，自1974年以来，划为原核微生物。细菌作为原核微生物，除了狭义的细菌外,还包括对动物和人具有致病作用的衣原体、立克次体、霉形体、螺旋体、放线菌等，此外还涉及蓝细菌、紫色光合细菌等。 一、细菌的分类与命名 (二) 细菌分类单元 属 种 菌株 是具有共性的若干种的组合，应与其他属有明显的差异。不同属之间的16SrRnA序列有较大的差异，但尚未提出差异的量化标准。 是微生物学分类的最基本单元，种可认为是一群性质相似的菌株，它与