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第七章细菌和噬菌体的遗传分析

* * 第七章 细菌和噬菌体的遗传分析 第一节 细菌和病毒在遗传学研究中的地位 1. 细菌概述 (1). 细菌的细胞:真核生物(eukaryotes) 细胞有细胞核,进行减数分裂和有丝分裂,细菌是原核生物(prokaryotes),没有细胞核,不进行减数分裂和有丝分裂。而是简单地复制和一分为二。 (2). 细菌的染色体:细菌为单倍体,其染色体为环形双链DNA分子,不形成核小体结构。 细胞壁(cell wall) 细胞膜(plasma membrane) 拟核(Nucleoid) 性纤毛(pili) 核糖体(Ribosome) (Flagella) 2. 病毒概述 病毒无细胞结构,仅由蛋白质和核酸构成,可以分为: (1). 动物病毒 (2). 植物病毒 (3). 细菌病毒(噬菌体, bacteriophage, phage) T噬菌体的结构 蛋白质外壳 核酸 3.细菌和病毒在遗传研究中的优越性 (1)世代周期短,繁殖系数高 (2)易于管理和进行生物化学分析,便于研究基因的作用 (3)遗传物质比较简单,适宜用于研究基因的结构、功能及表 达调控机制 (4)便于研究基因的突变 (5)可作为研究高等生物遗传表达调控的简单模型 第二节细菌和病毒的突变型及其筛选 一个正常的野生型(wild type)基因突变为一个新的等位基因,叫做基因突变(gene mutation)。带有突变基因并在表现型上显示出相对差异的个体叫突变型(mutant)。 野生型:能在基本培养基上生长的野生型菌株。 营养缺陷型:因丧失合成某些生活必需物质的能力,不能在基本培养基上生长的,突变型菌株。 形态突变:主要指菌落形态的突变,包括菌落大小、形状和颜色等可观察到的形态性状。 生理突变 :(1). 合成代谢功能突变型(anabolic functional mutant): 营养缺陷型(auxotroph) 野生型(wild type) 缺陷型(deficient) 原养型(prototroph) Met- 甲硫氨基酸突变型 Met+ Thi- 硫胺突变型 Thi+ Pur- 嘌呤突变型 Pur+ (2). 分解代谢功能突变型(catabolic functional mutant) lac- 乳糖突变型, 野生型为lac+ 抗性突变型(resistance mutant): Strr , Strs 分别表示对链霉素有抗性和敏感 T1r, T1s分别表示对T1噬菌体有抗性和敏感 一、 细菌突变体的类型 : 二、 突变型的筛选 (1). 根据菌落特点筛选:如Lac-突变菌株在伊红-美蓝培养基(EMB)上形成白色或粉红色菌落,而lac+菌落为有金属光泽的紫色菌落。 (2). 抗性突变型的筛选:将细菌涂布在含有某种抗生素或噬菌体的培养基上,能形成菌落的就是抗性突变菌株。 (3). 营养缺陷型的筛选:用印迹法(replica-plated method)把在完全培养基上生长的菌落影印到基本培养基上,鉴别出不能生长的克隆。再把它们转移到含有单一营养物质的培养基上,判定该突变型需要哪一种营养物质。 三、噬菌体的分类 烈性噬菌体:指侵入细菌细胞后,能立即破坏宿主细胞的遗传物质,导致宿主裂解的噬菌体 。 温和噬菌体:指侵入细菌以后,噬菌体的DNA或者独立存在于寄主细胞内,复制但不裂解宿主细胞,也不影响宿主细胞的正常代谢,如P1 噬菌体。或者通过交换而整合到细菌的染色体上,进入溶原性(lisogeny)生活周期。整合在宿主染色体中的噬菌体称为原噬菌体(prophage),被溶原性噬菌体感染了的细菌称为溶原性细菌(lysogenic bacterium)。 四、噬菌体的突变型 (1) 快速溶菌突变型:由于噬菌体的侵染,致使细菌细胞裂解的过程叫溶菌(bacteriolysis),致使菌落上出现一些圆形而清亮的小洞,称为噬菌斑(plaque)。野生型T2噬菌体裂解速度较慢,产生的噬菌斑小而边缘模糊,记为r+。突变型T2噬菌体裂解速度较快,产生的噬菌斑大而边缘清晰,记为r-。因此可根据噬菌斑的大小来鉴别突变体。 (2) 寄主范围突变型:野生型T2只能浸染B菌株,不能感染B2菌株,记为h+。野生型T2产生抗性突变,既能浸染B菌株,也能浸染B2菌株,记为h-。当在含有B菌株和B2菌株的固体培养基

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