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第六章 聚合酶链式反应 聚合酶链反应 (Polymerase Chain Reaction, PCR) 80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。 具有特异、敏感、产率高、 快速、 简便、重复性好、易自动化等突出优点；能在一个 ephendof 管内将所要研究的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍。 发展简史 Korana 于1971 年最早提出核酸体外扩增的设想：“经过 DNA 变性，与合适的引物杂交，用DNA聚合酶延伸引物，并不断重复该过程便可克隆 tRNA 基因”。 1985年美国 PE-Cetus 公司人类遗传研究室的Mullis 等发明了聚合酶链反应。其原理类似于DNA 的体内复制 , Klenow 酶催化，PCR 产物特异性较差，合成的 DNA 片段不均一。 PCR 由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成。类似于 DNA 的体内复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。 ① 模板 DNA 变性：模板 DNA 经 93℃左右加热一定时间后，双链 DNA 模板或经 PCR 扩增形成的双链 DNA 解离成为单链。 ② 模板 DNA 与引物的退火(复性)：模板 DNA 经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板 DNA 单链的互补序列配对结合。 ③ 引物的延伸：DNA 模板--引物结合物在 Taq