第四章目的基因的分离与克1.pptVIP

第四章 目的基因的分离 1 目的基因：所谓目的基因是根据需要分离出用于克隆（改造、扩增或表达的）特定基因或DNA片段。 2 怎样理解克隆这个概念 基因的克隆，实质上包含着待研究的目的基因的分离和鉴定两个主要内容 1基因文库(gene library或gene bank) 基因文库 指在一种载体分子上随机克隆着某种生物、组织、器官等遗传信息，基因工程中，需要将某种生物的遗传信息，贮存在可以长期保存的稳定的重组体中，以备需要时随时能够应用。这种重组DNA分子的群体就是基因文库 。 基因文库的类型 类型一 基因组文库：用基因工程的方法，人工构建的含有某一生物基因组DNA的各种片段的克隆群。用适当的方法（通常为限制性内切酶消化）将某一生物细胞的整个基因组DNA切割成大小合适的片段，并将这些片段与适当的载体进行体外重组，再引入到相应的宿主细胞中繁殖和扩增，形成的含有重组DNA分子的群体就是基因组文库。  类型二 cDNA文库：把纯化的某种生物特定发育阶段特定组织的mRNA反转录成cDNA所构成的文库。 一个完整的基因组DNA文库，所具有的理论克隆数和实际克隆数 理论 ：给体生物基因组的总量或分子量的大小除以克隆片段的平均大小所得的数值。 3×106kb/15kb = 2 ×105 实际： DNA片段是随机的，故克隆也是随机的