细胞工程第十一章动物细胞培养的应用技术.pptVIP

第十一章 动物细胞培养的应用技术 第一节 动物细胞培养在单克隆抗体制备中的应用 1975年kohler和milstein首次用B淋巴细胞杂交瘤技术制备出均一性的单克隆抗体获得1984年诺贝尔奖。 单克隆抗体概念：每一克隆B细胞所产生的理化性状高度均一、组成均一、只与同一种抗原决定族反应的抗体，称为单克隆抗体（monoclonal antibody,McAb）。 一、杂交瘤技术的基本原理和过程 （一）细胞的选择与融合 （二）选择培养基的应用 （三）有限稀释与抗原特异性选择 二、杂交瘤技术制备单克隆抗体的基本过程及方法 二、杂交瘤技术制备单克隆抗体流程 三、单克隆抗体的基本技术 1.抗原提纯与动物免疫： 抗原纯度高：电泳纯 与骨髓瘤细胞同源的BALB/c小鼠 2.细胞的选择： A 经过抗原免疫的B细胞（脾细胞）。 B 肿瘤细胞(多发性骨髓瘤细胞:Sp2/0）。 3.细胞融合： 融合剂：聚乙二醇 (PEG,常用聚合度1000~2000浓度w/v：40%) 细胞比例： 1:2~1:10，常用1:4。 反应时间：2~4min。 4.培养基的选择：HAT培养基。含有三种关键成分： 次黄嘌呤(hypoxanthine,H) 氨甲蝶呤(aminopterin,A) 胸腺嘧啶核苷(thymidine,T). 5.细胞的DNA合成一般有两条途径： A：由糖