PAGE测定蛋白质的相对分子量.pptVIP

SDS - PAGE测定蛋白质的相对分子量 一、实验目的 了解SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理，并学会用这种方法测定蛋白质的相对分子量。 二、实验原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳之所以能将不同的大分子化合物分开，是由于这些大分子化合物所带电荷的差异和分子大小不同之故，如果将电荷差异这一因素除去或减小到可以忽略不计的程度，这些化合物在凝胶上的迁移率则完全取决于相对分子质量。 SDS是十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate）的简称，它是一种阴离子去污剂，它能按一定比例与蛋白质分子结合成带负电荷的复合物，其负电荷远远超过了蛋白质原有的电荷，也就消除或降低了不同蛋白质之间原有的电荷差别，这样就使电泳迁移率只取决于分子大小这一因素，就可根据标准蛋白质的相对分子量的对数对迁移率所作的标准曲线求得未知蛋白质的相对分子质量。本实验用目前常用的垂直平板电泳，样品的起点一致，便于比较。 三、实验器材 直流稳压电泳仪 垂直平板电泳槽（含玻璃板、夹条、梳齿、夹子等） 移液器（1.0ml、200μl、20μl） 微量注射器（20μl） 烧杯、培养皿、试管、滴管、直尺 脱色摇床 四、实验试剂 1. 凝胶贮备液：丙烯酰胺（Acr）29.2g和亚甲基双丙烯酰胺（Bis）0.8g重蒸水溶 解后，定容至100ml，棕色试剂瓶4℃保存，30天内使用。 2