实验9 具体步骤结果.pptVIP

?遗传学综合性实验要求如下， 1）实验报告以综合性小论文方式提交； 2）每人自己写一份，注明小组成员，同时小组成员之间论文不能完全雷同，结果图相同，文字陈述不能完全拷贝； 3）论文重点突出同源重组问题，部分结果不理想试验组重点分析试验中出现的问题；论文前言最好了解一下相关资料，比如同源重组的原理以及相关基因的信息； 4）实验论文提交最后时间为2015年6月15日（第16周星期一）。 5）针对图的结果，都要把自己小组的结果陈述清楚，不能只有图，没有文字！ 最后论文成绩占总成绩30%喔！ 实验课成绩 总成绩=7次基础实验平均成绩*60%+论文成绩*30%+平时成绩*10% 综合性实验 具体安排 实验思路 确定目标基因，目标生物DNA提取 目标基因PCR扩增 PCR产物纯化 pUC19骨架进行重组 转化大肠杆菌 重组子筛选 琼脂糖电泳 琼脂糖电泳 PCR\电泳 蓝白斑筛选 具体安排 理解实验原理（第9周） 第11周 每个小组交一份实验计划 第12周 DNA提取和PCR 第13周 DNA纯化和重组转化 第14周 PCR验证重组子 选定扩增基因 每个组4个人，可以选做两个基因片段（建议每两个人做一个基因片段） 每步工作的具体负责人和主要任务 绘一个实验流程图和构建好的载体示意图 实验计划要求 供选择基因 CG1844(G-rich,666bp)果蝇硒蛋白，功能未知 /nuccore/NC_004354.4?report=genbankfromo供选择基因-2 CG7050(neurexin-1， 5514bp)果蝇学习记忆相关基因 /nuccore/NT_033777.3?report=genbankfromo供选择基因-3 CG8864 （Cyp28a5，2900bp） 乙醇代谢解毒相关 /nuccore/NT_033779.5?report=genbankfromo引物序列（红色标记为pUC19的同源序列） CG1844?length?200 PrimerF1 5’-acacaggaaacagctatgaccatgattacgcca?aacggattgccgagtaacac PrimerR1 5’-?cacgacgttgtaaaacgacggccagtgaattcg?actatgtggcgccttcattc ? CG7050?length?250 PrimerF2 5’-?acacaggaaacagctatgaccatgattacgcca?cctcgaaattgaaccgaaaa PrimerR2 5’-?cacgacgttgtaaaacgacggccagtgaattcg?ttactgcggttgattccaca ? CG8864 length 237bp PrimerF3 5’-?acacaggaaacagctatgaccatgattacgcca?gttaacatccgcagccaact PrimerR3 5’-?cacgacgttgtaaaacgacggccagtgaattcg?acccacacagaggcacctac 第12周 DNA提取和PCR扩增 DNA提取： 以果蝇为例课件介绍 电泳检测DNA质量和大致浓度 PCR扩增，具体操作见课件介绍原理和实验步骤。 图一 果蝇基因组DNA提取电泳图 Marker:15000bp PCR程序 Takara公司的Premix TaqTM Hot Start Version 成分 使用量 Premix Taq HS 25μl 上游引物 2μl 下游引物 2μl 总基因组 1.5μl ddH2O(20μl) Up to 50μl 循环参数 32cycle 94℃ 90 sec 94℃ 30 sec 57℃ 30 sec 72℃ 45 sec 72℃ 10 min 4℃ 取5μl扩增产物以1% 琼脂糖凝胶电泳检测PCR结果。 图二 PCR电泳检测图 M2 1 1 2 2 3 3 图二 PCR电泳检测图 M2 1 1 2 2 3 3 图二 PCR电泳检测图 M2 1 1 2 2 3 3 第13周 DNA纯