01蛋白质的结构和功能.ppt

(四)、蛋白质的紫外吸收 蛋白质分子中含有共轭双键结构的色氨酸和酪氨酸，因此在280nm波长处有特征性吸收。在此波长范围内，蛋白质的OD280与其浓度呈正比关系，因此可作蛋白质定量测定。 (五)、蛋白质的呈色反应 茚三酮反应： 蛋白质经水解后产生的氨基酸可发生茚三酮反应 当氨基酸与茚三酮共热时，AA被氧化脱氨、脱羧，而茚三酮被还原，其还原产物与氨结合，再与另一分子茚三酮缩合成为蓝紫色化合物，测A570nm。 (五)、蛋白质的呈色反应 双缩脲反应： 蛋白质和多肽分子中肽键在稀碱溶液中与硫酸铜共热，呈现紫色或红色，称为双缩脲反应。 *双缩脲反应可用来检测蛋白质水解程度 * i 模体(motif) 是蛋白质分子具有特定空间构象和特殊功能的结构成分。其中一类就是具有特殊功能的超二级结构。 一些常见的模体： 锌指 螺旋-环-螺旋 螺旋-转角-螺旋 碱性亮氨酸拉链 DNA结合蛋白的锌指结构模体 钙结合蛋白中结合钙离子的模体 亮氨酸拉链 三、蛋白质的三级结构 定义： 整条肽链中全部氨基酸残基的相对空间位置，也就是整条肽链所有原子在三维空间的排布位置。 稳定因素： 次级键——疏水作用、离子键(盐键)、氢键和Van der Waals力 共价键——二硫键也参与维持三级结构 N 端 C端 肌红蛋白(Mb) 结构域 分子量较大的蛋白质三级结构常可折叠成多个结构较为紧密的区域，各行其功能，称为结构域(domain)，它是三级结构层次上的局部折叠区域。 3-磷酸甘油醛脱氢酶亚基 大多数结构域含有序列上连续的100至200个氨基酸残基，若用限制性蛋白酶水解，含多个结构域的蛋白质常分解出独立的结构域，而各结构域的构象可以基本不改变，并保持其功能 超二级结构则不具备这种特点。 结构域可看作是球状蛋白质的独立折叠单位，有较为独立的三维空间结构。 纤连蛋白分子的结构域 四、四级结构 亚基(subunit)： 许多功能性蛋白质分子含有2条或2条以上多肽链。每一条多肽链都有完整的三级结构，称为亚基。 四级结构： 亚基间以非共价键连接并呈特定的三维空间排布。蛋白质分子中各亚基的空间排布及亚基接触部位的布局和相互作用，称为蛋白质的四级结构。 各亚基间的结合力主要是氢键、离子键。 血红蛋白 血红蛋白 血红蛋白 第四节 蛋白质的理化性质及其分离纯化 一、蛋白质的理化性质 (一)蛋白质的两性电离性质 蛋白质分子除两端的氨基和羧基可解离外氨基酸残基侧链中某些基团，在一定的溶液pH条件下可解离成带负电荷或正电荷的基团。 蛋白质的等电点(isoelectric point, pI) 当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质解离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，净电荷为零，此时溶液的pH成为蛋白质的等电点。 Amino acid pI M.W. Glycine 5.97 75 Alanine 6.00 89 Valine 5.96 117 Leucine 5.98 131 Isoleucine 6.02 131 Phenylalanine 5.48 165 Proline 6.30 115 tryptophan 5.89 204 serine 5.68 105 tyrosine 5.66 181 Amino acid pI M.W. cystein 5.07 121 methionine 5.74 149 asparagine 5.41 132 glutamine 5.65 146 cystein 5.60 119 aspartic acid 2.97 133 glutamic acid 3.22 147 Lysine 9.74 146 Arginine 10.76 174 Histidine 7.59 155 人体大部分蛋白质的pI 为 5.0左右, 因此在生理pH7.4环境下带负电荷。 pI 7.4: 碱性蛋白质，如鱼精蛋白、组蛋白 pI 7.4: 酸性蛋白质，如胃蛋白酶、丝蛋白 利用蛋白质两性电离的性质，可以通过电泳、离子交换层析等技术分离蛋白质。 (二)蛋白质的胶体性质 蛋白质属于生物大分子之一，分子量可 自1万至100万KD之间，其分子的直径 可达1~100nm，为胶粒范围之内。 胶体性质：布朗运动、丁达尔现象、电 泳现象、不能透过半透膜、具有吸附能力 维持蛋白质胶体稳定性的因素： 表面电荷 水化膜 + + + + + + + 带正电荷的蛋白质 － － － － － － － － 带负电荷的蛋白质 在等电点的蛋白质 水化膜 + + + + + + + + 带正电荷的蛋白质 － － － － － － － － 带负电荷的蛋白质 不稳定的蛋白质