生物工程大实验报告.docVIP

生物工程大实验 30L发酵罐上黄原胶发酵实验 姓 名： 学 号： 学 院： 生命学院 专 业： 生物工程 年 级： 同组成员： 1. 材料和方法 1.1菌株：HYJ 1.2培养基 1.2.1斜面培养基（100ml） 葡萄糖 3.0；蛋白胨 0.5；酵母粉 0.3； 氯化钠 0.5；琼脂 2.0；pH 7.0-7.3 灭菌条件：115℃，20min；培养温度：30℃；培养时间：24-48 h 1.2.2种子培养基（100ml） 葡萄糖 2.0；蛋白胨 0.5；酵母粉 0.1； 牛肉膏 0.3 g；pH 7.0-7.3 灭菌条件：115℃，20 min；培养温度：30℃；培养时间：10-15 h 1.2.3发酵培养基（100ml） 葡萄糖 3.0；蛋白胨 0.2；酵母粉 0.1；Na2HPO4·12H2O 0.252；KH2PO4 0.3；K2SO4 0.1；MgSO4·7H2O 0.1；pH 7.0-7.3 灭菌条件：115℃，20 min；培养温度：30℃；培养时间：48-62 h 1.3. 培养条件 1.3.1斜面培养 1）配置400 ml的斜面培养基，分装试管，于115℃下灭菌20 min，之后摆斜面，冷却至室温后，将凝固后的斜面放于30℃培养箱过夜。 2）转接斜面菌种，将转接好的斜面菌放于30℃培养箱培养24-48 h。 1.3.2一级种子培养 1）配置种子培养基：按照种子培养基配方配制3000 ml，分别分装到5000 ml和500 ml的三角瓶中，装液量分别为100 ml/500 ml三角瓶（用于一级种子培养）；1000 ml/5000 ml三角瓶（用于二级种子培养），于115℃下灭菌20 min。 2）接种：将培养好的斜面菌种接种到一级种子培养基中（100 ml/500 ml三角瓶），接种量为每瓶2-3接种环，放在30℃摇床培养10-15 h，转速为200 rpm。 1.3.3二级种子培养 将培养好的一级种子接种到二级种子培养基中（1000 ml/5000 ml三角瓶），接种量为10%（v/v），放在30℃摇床培养6-8 h，转速为200 rpm。 1.3.4发酵罐培养 1）配置发酵培养基20 L，考虑到接入的种子液的体积（10%, 2000 ml），所以培养基配置定容时为18 L。 2）将培养好的二级种子接种到发酵罐中，接种量为10%（v/v），温度30℃，发酵罐初始搅拌转速约为100 rpm，通风量1.5-2.0 vvm，初始pH为7.0-7.3，中间过程不控制pH。 1.4 检测方法 1.4.1发酵液OD 取一定体积的发酵液进行适当稀释，然后用分光光度计在620 nm波长下测定吸光度。 1.4.2葡萄糖含量 取一定发酵液进行适当稀释，8000 rpm/min 离心15 min，取上清，采用SBA检测。 1.4.3发酵液粘度 发酵过程中取大约100 ml发酵液，用Blankspoon粘度计(DV-E，VISCOMETER)测定其粘度。 1.4.4黄原胶产量测定 发酵结束后取10 ml发酵液，用3倍体积无水乙醇沉淀黄原胶， 8000 rpm/min 离心15 min，去上清，沉淀的黄原胶50℃通风箱内干燥至恒重，用分析天平称重。 1.4.5 pH值测定 用pH计测定发酵液的pH值。 1.4.6菌体干重的测定 取发酵液10 ml加入20 ml去离子水稀释，放置在80℃水浴锅中用1 mol/l NaOH调节pH10后，水浴15 min，然后再用1 mol/l HCl调节pH7.0，迅速12000 rpm离心20 min，去上清，留沉淀，于50℃通风箱内干燥至恒重（8-10 h）。 1.4.7计划取样时间及待测参数： 前24 h发酵过程中，每隔4 h取一次样测定pH、发酵液OD、黄源胶产量、菌体干重，葡萄糖含量、发酵液粘度。 2. 结果与讨论 2.1实验图片 其中A为斜面上菌的镜检图B为二级种子镜检图C为D为 2.2 30L发酵罐上的发酵曲线 发酵曲线汇总 菌干重 上图为菌干重数据以及拟合曲线可以看出实际的数据与拟合曲线拟合的并不是很好而且我们由于接种量比较大为胶干重曲线 其中A为原始数据作图，B为删掉0小时数据作图 在0h我们取样时可能未等发酵液混匀后便取，因而测得的胶干重数据异常，可以看出A图数据拟合的并不是很好，在B图中我将0h胶干重设为0，可以看出拟合度大大提高。从数据来看，胶干重测量还是不错的，当然由于提取胶的方法比较简单，会有部分菌带到胶中，这也是不可避免的误差。可以看出在15小时左右时胶的产生速率最大，而到30小时左右时胶的产生速率有所下降并在逐渐降低，这与底物的消耗、溶氧的降低等因素有关。 残糖曲线 从图中可以看出所测的数据与拟合