2013人教版选修三12《基因工程的基本操作程序》课件t.pptVIP

(4)在上述实验中，为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接,酶切时应选用的酶是________。 【答案】　(1)目的基因—载体连接物　载体—载体连接物　目的基因—目的基因连接物　分离纯化 (2)载体—载体连接物 (3)启动子　mRNA (4)EcoRⅠ和BamHⅠ(只答一种酶不可) 【误区警示】　(1)切割质粒和目的基因的限制酶一般是同一种酶，以获得互补的末端，利于重组质粒的构建。 (2)目的基因的首端和尾端需加上启动子和终止子。 要点三　将目的基因导入受体细胞 不同受体细胞的常用导入方法 受体细胞 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 常用方法 农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法 显微注射技术 Ca2＋处理法 受体细胞 体细胞 受精卵 原核细胞 受体细胞 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 转化过程 以农杆菌转化法为例 将目的基因插入Ti质粒的TDNA上→农杆菌→导入植物细胞→整合到受体细胞的DNA上→表达 将含有目的基因的表达载体提纯→取受精卵→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物 Ca2＋处理细胞→感受态细胞→基因表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子 特别提醒　(1)完成基因表达载体的构建，需要限制性核酸内切酶和DNA连接酶。 (2)Ca2＋(或CaCl2溶液)对微生物细胞的作用是增加细胞壁的通透性。 (3)目的基因能否在植株细胞内稳定保存并表达的关键是目的基因是否插入到受体细胞染色体DNA上(利用的原理是基因重组)。 科学家通过基因工程的方法，将苏云金芽孢杆菌的Bt毒蛋白基因转入普通棉株细胞内，并成功实现了表达，从而培育出了能抗棉铃虫的棉花植株——抗虫棉。其过程大致如图所示，请分析回答： 例3 (1)Ti质粒是农杆菌中的一种质粒，其上有TDNA，把目的基因插入Ti质粒的TDNA是利用TDNA______________________________ ____________________________________________________________的特点。 (2)Bt毒蛋白基因转入普通棉株细胞内并成功实现表达的过程，在基因工程中称为________________。 (3)将目的基因导入受体细胞的方法有很多种,该题中涉及的是________________。 (4)目的基因能否在棉株内稳定遗传的关键是__________________。 【解析】　本题以抗虫棉的培育过程为背景,考查了运用基因工程技术生产转基因作物的步骤、方法。(1)Ti质粒的最大优点是能将目的基因导入到受体细胞的染色体DNA中，从而使目的基因在棉花体内稳定维持和表达。 (2)目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程称为转化。(3)将目的基因导入植物细胞的方法很多，以农杆菌中的Ti质粒为目的基因载体的称为农杆菌转化法。(4)目的基因能否在真核生物中稳定遗传的关键是转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因。 【答案】　(1)可转移至受体细胞并且整合到受体细胞染色体DNA上　(2)转化　(3)农杆菌转化法　(4)目的基因是否插入到受体细胞染色体DNA上 【探规寻律】　目的基因导入受体细胞的结果 要点四　目的基因的检测与鉴定 类型 步骤 目的 原理 过程 结果 分子水平检测 第一步 转基因生物染色体的DNA是否插入了目的基因 DNA分子杂交 含目的基因的DNA探针与转基因生物的基因组DNA分子杂交 若有杂交带，说明插入成功 第二步 目的基因是否转录出mRNA 分子杂交 含目的基因的DNA探针与转基因生物的mRNA杂交 若有杂交带，说明转录成功 类型 步骤 目的 原理 过　程 结　果 分子水平检测 第三步 目的基因是否翻译成蛋白质 抗原—抗体杂交 提取蛋白质,与已知的相应抗体杂交 若有杂交带，表明翻译成功 个体水平鉴定 做抗虫、抗病的接种实验，以确定是否有抗性以及抗性的程度；基因工程产品与天然产品的功能进行活性比较，以确定功能是否相同 (2011·高考海南卷)回答有关基因工程的问题： (1)构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生黏性末端，也可能产生________末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生________(相同、不同)黏性末端的限制酶。 例4 (2)利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等，其中启动子的作用是________。在用表达载体转化大肠杆菌时，常用________处理大肠杆菌，以利于表达载体进入；为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为______