基因工程及其应用浙科版自用整理.pptVIP

基因工程又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。通俗的说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的性状。 黏性末端和平末端 质粒的特点 1、原核细胞拟核DNA分子以外能自主复制的小型环状DNA分子，通常大小只有拟核的1%； 2、质粒的存在对宿主细胞无影响； 3、质粒的复制能在宿主细胞内完成。 化学合成目的基因的方法 三、基因工程基本步骤 第一步：获得目的基因 　　基因工程的第一步，是取得人们所需要的特定基因，即目的基因，也称外源基因，如基因工程中用到的抗虫基因，抗病基因、种子的贮存蛋白基因，以及人的胰岛素基因、干扰素基因等都是目的基因。 获取目的基因 利用PCR技术扩增 化学合成 已知序列： 从基因文库获得 未知序列： 聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction) 获取更多的目的基因 问题1：如果我们没得到目的基因，但是我们获得了目的基因转录的mRNA，那怎样才能得到目的基因呢？ 提示：结合“中心法则”思考 逆转录法：以信使RNA为模板，在逆转录酶的作用下将脱氧核苷酸合成合成DNA(基因)。 问题2：如果我们没得到目的基因，但是我们获得了目的基因控制合成的蛋白质，那怎样才能得到目的基因呢？ 提示：结合“中心法则”思考 　　根据蛋白质的氨基酸顺序推测出信使RNA核苷酸顺序，再据此推测出基因DNA的脱氧核苷酸顺序。用游离脱氧核苷酸直接合成相应的基因。 DNA合成仪 使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增 利用PCR技术扩增目的基因： PCR扩增仪 IMN 过程： 高温解旋、低温连引、中温延伸三步曲 解旋 连引 延伸 质粒 DNA分子 （含目的基因） 限制酶处理 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 DNA连接酶 重组DNA分子（重组质粒） 同一种 过程: 第二步：形成重组DNA分子--－核心 细菌 供体细胞 取出质粒 取出DNA 用同一种限制酶切断DNA 用DNA连接酶连接目的基因 重组质粒 基因表达载体的组成： 思考：在重组DNA分子的时候，产物一定是质粒与目的基因相连吗？ 目的基因+目的基因自连 载体+载体自连 目的基因+载体连接 第三步：将重组DNA分子导入受体细胞 将重组DNA导入受体细胞 扩增 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 植物病毒侵染法 ——显微注射法 ——用CaCI2处理 受体细胞不同，导入的方法也不同 受体细胞 基因枪 第四步：筛选含有目的基因的受体细胞 　　大量的受体细胞接受不多的目的基因。处理的受体细胞中真正摄入了目的基因的很少，必须将它从中筛选出来。(方法?) 无表达产物 无表达产物 有表达产物 无表达产物 第五步：目的基因的表达 标记基因 目的基因 将每个受体细胞单独培养形成菌落，检测菌落中是否有 的表达产物。淘汰无表达产物的菌落，保留有表达产物的进一步培养、研究。 常用方法： 　　1、利用DNA分子杂交技术检测 四环素 抗性基因 氨苄青霉 素抗性基因 　　已知某质粒中存在两个抗性基因，如图所示。目的基因不插入到氨苄青霉素抗性基因中，而大肠杆菌不带有任何抗性基因。 　　如何筛选含有目的基因的大肠杆菌？ 2、利用标记基因(抗性基因)进行筛选 含氨苄青霉素的完全培养基 筛选含有目的基因的受体细胞 1、分子水平的鉴定： 检测目的基因是否表达蛋白质— 抗原—抗体杂交 2、个体生物学水平的鉴定—— 病虫直接侵染个体 目的基因是否表达的鉴定方法： １、基因工程与遗传育种 1993年，中国农业科学院的科学家成功地培育出了抗棉铃虫的转基因抗虫棉，抗虫的基因来自苏云金杆菌。苏云金杆菌形成的伴胞晶体是一种毒性很强的蛋白质晶体，能使棉铃虫等鳞翅目害虫瘫痪致死。科学家将编码这个蛋白质的基因导入作物，使作物自身具有抵御虫害的能力。 生长快、肉质好的转基因鱼(中国) 乳汁中含有人生长激素的转基因牛(阿根廷) 转黄瓜抗青枯病基因的甜椒 转鱼抗寒基因的番茄 2、基因工程与疾病治疗 我国生产的部分基因工程疫苗和药物 　　许多药品的生产是从生物组织中提取的。受材料来源限制产量有限，其价格往往十分昂贵。 　　微生物生长迅速，容易控制，适于大规模工业化生产。若将生物合成相应药物成分的基因导入微生物细胞内，让它们产生相应的药物，不但能解决产量问题，还能大大降低生产成本。 　　胰岛素从猪、牛等动物的胰腺中提取，100Kg胰腺（1000头猪）只能提取4-5g的胰岛素，其产量之低和价格之高可想而知。 　　将合成胰岛素的基因导入大肠杆菌，每2000L培养液就能产生100g胰岛素！使其价格降低了30%-50%! * 能发光的水母 能否能否让热带鱼也发光? 设想 不能发光的热带斑马鱼 转基因生物：能发