状元之路2014高考生物新课标通用版一轮复习选1-3专题三DNA和蛋白质技术与植物有效成分的提取.pptVIP

一、DNA的粗提取与鉴定 1．基本原理 (1)DNA在不同浓度的 NaCl溶液中的溶解度不同，在0.14 mol/L的 NaCl溶液中的溶解度最低； (2)DNA不溶于酒精溶液； (3)DNA不被蛋白酶所水解； (4)DNA可被二苯胺染成蓝色。 2．方法目的 特点提醒　①哺乳动物成熟的红细胞中不含细胞核，也没有00DNA，不适于作DNA提取的材料，但却是提取血红蛋白的理想材料。 ②实验过程中两次用到蒸馏水，第一次目的是使成熟的鸡血细胞涨破释放出DNA；第二次目的是稀释 NaCl溶液。 二、多聚酶链式反应(PCR)扩增DNA片段 1．实验原理 DNA分子复制。 2．实验材料 引物、PCR仪(自动调控温度)、 TaqDNA聚合酶、DNA模板、原料(四种脱氧核苷酸)。 3．实验过程 (1)模板DNA的变性：模板DNA经加热至94 ℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备。 (2)模板DNA与引物的复性：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55 ℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。 (3)引物的延伸：DNA模板—引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以4种脱氧核苷酸为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原则，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。 重复循环变性—复性—延伸过程，就可获得更多的半保留复制链，而且这种新链又成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4 min，2～3 h就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。其具体实验操作步骤如下： (1)按照PCR反应体系的配方将所需试剂摆放在实验桌上； (2)用微量移液器按照配方在微量试管中依次加入各组分； (3)盖严离心管口的盖子，用手指轻轻弹击管壁； (4)将微量离心管放在离心机上，离心约10 s。 (5)将离心管放入PCR仪上，设置好PCR仪的循环程序。以上过程可概括为准备、移液、混合、离心、反应五步。 特别提醒　 特别提醒　 三、血红蛋白的提取和分离 1．方法及原理 2.实验操作程序 (1)样品处理： ①红细胞的洗涤：除去血浆蛋白等杂质，有利于后续步骤的分离纯化； ②血红蛋白的释放：使红细胞涨破，血红蛋白释放出来； ③分离血红蛋白溶液：经过离心使血红蛋白和其他杂质分离开来，便于下一步对血红蛋白的纯化。 (2)粗分离——透析：除去样品中相对分子质量较小的杂质。 (3)纯化：一般采用凝胶色谱法对血红蛋白进行分离和纯化。 (4)纯度鉴定：一般用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳方法，来测定蛋白质的相对分子质量，即对血红蛋白进行纯度鉴定。 四、植物芳香油的基本知识 1．植物芳香油的基本知识 (1)成分：组成较复杂主要包括萜类化合物及其衍生物。 (2)特点：具有很强的挥发性，易溶于有机溶剂。 (3)应用：玫瑰精油是制作高级香水的主要成分，能使人产生愉快感；橘皮精油的主要成分是柠檬烯，具有诱人的橘香味，是食品、化妆品和香水配料的优质原料。 2．玫瑰精油的提取流程 4．水中蒸馏、水上蒸馏、水气蒸馏的区别 (1)这三种方法的基本原理相同，但原料放置位置不同。 ①水中蒸馏：原料放在蒸馏容器的水中，水要完全浸没原料。 ②水上蒸馏：容器中水的上方有筛板，原料放在筛板上，水量以沸腾时不浸湿原料为宜。 ③水气蒸馏：蒸馏容器下方有一排气孔，连接外源水蒸气，上方有筛板，上面放原料。 (2)各自特点：水中蒸馏设备简单，成本低，易操作；而水上蒸馏和水气蒸馏时间短，出油率高。 5．植物芳香油的提取方法的比较 6.玫瑰精油的提取操作关键 (1)安装装置顺序：从左到右，自下而上； (2)温度计位置：温度计水银球的上限与蒸馏瓶侧管的下限处在同一水平线上； (3)冷凝管中的水流向：从下方进水，上方出水，与蒸气流向相反； (4)加热时防暴沸：垫石棉网，向液体中加入几粒沸石或瓷片； (5)烧瓶内液体量：烧瓶容积的1/3～2/3； (6)除水：加入无水 Na2SO4后，放置时间可适当延长些； (7)温度及时间：为提高产品质量，要严格控制蒸馏温度，可适当延长蒸馏时间。 7．橘皮精油提取操作的关键 (1)橘皮的处理：干燥后一定要用石灰水浸透，时间至少10 h以上。 (2)压榨液的处理：①可在压榨液中加入明矾，使其沉淀变清；②分离离心液的油层(用分液漏斗)，经静置、过滤、离心后得到的油澄清而透明，但仍有少量水分和蜡质等杂质，应在5～10 ℃条件下静置5～7 d，使水分与杂质下沉，然后用吸管吸出上层澄清的油层，再通过垫有滤纸或石棉纸的漏斗进行减压抽滤，得到黄色油状的橘皮精油。 五、胡萝卜素的提取 1．胡萝卜素的基本知识 (1)分类：胡萝卜素的化学分子式中包含多个碳碳双键，根据双键的数目可以将胡萝卜素划分为α、β、γ三类，β-胡萝