清华大学微生物学第7章3-4节.pptVIP

2、PEG介导的转化 不自然形成感受态的G+细菌如枯草芽孢杆菌和放线菌，可通过聚乙二醇的作用实现。 3、电穿孔法 所谓电穿孔法是用高压脉冲电流击破细胞膜或将细胞膜击成小孔，使各种大分子能通过这些小孔进入细胞，所以又称电转化。 4、基因枪转化 该方法是将包裹有DNA的钨颗粒像子弹一样用高压射进细胞并使DNA留在细胞内，特别是留在细胞器中。 3）F′×F-杂交 F′×F-与F+×F-的不同： 供体的部分染色体基因随F′一起转入受体细胞 a）与染色体发生重组； b）继续存在于F′因子上，形成一种部分二倍体； 细胞基因的这种转移过程又常称为性导（sexduction）、F因子转导（F-duction），或F因子媒介的转导（F-mediated transduction）。 “接合” “转导” 及“转化”这三种在自然界中存在的细菌遗传重组过程各自的特点： （四）原生质体融合 通过人为方法， 使遗传性状不同的两个细胞的原生质体 进行融合， 获得兼有双亲遗传性状的稳定重组子的过程 称为原生质体融合。 （四）原生质体融合 （四）原生质体融合 二、真核微生物的基因重组 （一）有性杂交 细胞（ ＋） 细胞（－） 有性接合 染色体重组 新遗传型 能产生有性孢子的酵母菌、霉菌和蕈菌都可以进行有性杂交 （二）准性杂交 细胞（ ＋） 细胞（＋） 准性接合 基因重组 新遗传型 菌丝联结 质配 核配 有丝分裂交换 单倍体杂合子 在半知菌类中最为常见 半知菌的准性生殖 * 第三节 基因重组和杂交育种 一、原核生物的基因重组 （一）转化 供体菌 受体菌 DNA片段 1928年，Griffith发现肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae） 的转化现象,目前已知有二十多个种的细菌具有自然转化的能力 进行自然转化，需要二方面必要的条件： 1、建立了感受态的受体细胞 感受态细胞：具有摄取外源DNA能力的细胞 自然感受态的出现是细胞一定生长阶段的生理特性，受细菌 自身的基因控制； 人工感受态则是通过人为诱导的方法，使细胞具有摄取DNA的 能力，或人为地将DNA导入细胞内 2、外源游离DNA分子（转化因子） 人工转化 用CaCl2处理细胞，电穿孔等是常用的人工转化手段。 在自然转化的基础上发展和建立的一项细菌基因重组 手段，是基因工程的奠基石和基础技术。 不是由细菌自身的基因所控制； 用多种不同的技术处理受体细胞，使其人为地处于一 种可以摄取外源DNA的“人工感受态”。 质粒的转化效率高； 噬菌体DNA被细胞摄取并产生有活性的病毒颗粒 转染(transfection)： 转染的特点：提纯的噬菌体DNA以感染的（而非转化）途径进入细胞并表达后产生完整的病毒颗粒。 噬菌体能够感染原生质体吗？ （二）细菌的转导（transduction） 由噬菌体介导的细菌细胞间进行遗传交换的一种方式 一个细胞的DNA通过病毒载体的感染转移到另一个细胞中 细菌转导的类型： 普遍转导 局限转导 完全普遍转导 流产普遍转导 低频转导 高频转导 局限转导与普遍转导的主要区别 溶源转变 普遍转导（generalized transduction） 通过极少数完全缺陷噬菌体的错误包装，把供体细胞的小片段DNA携带到受体细胞中，通过交换与整合，使后者获得前者部分遗传性状的现象，称为转导。 普遍转导的三种结果： 外源DNA被降解，转导失败。 进入受体的外源DNA通过与细胞染色体的重组交换 而形成稳定的转导子 流产转导 完全普遍转导 转导DNA不能进行整合、重组和复制，但其携带的基因可经过转录而得到表达。 因此群体中仅一个细胞含有DNA，而其它细胞只能得到其基因产物，在选择培养基平板上形成微小菌落 流产普遍转导 局限转导 温和噬菌体感染 整合到细菌染色体的特定位点上 宿主细胞发生溶源化 溶源菌因诱导而发生裂解时， 在前噬菌体二侧的少数宿主 基因因偶尔发生的不正常切 割而连在噬菌体DNA上 部分缺陷的温和噬菌体 把供体菌的少数特定基因转移到受体菌中 温和噬菌体λ裂解时的不正常切割：包含gal或bio基因 缺陷噬菌体DNA分子在宿主细胞内能够象正常的λDNA分子一样进行复制、包装，提供所需要的裂解功能，形成转导颗粒，但没有正常噬菌体的溶源性和增殖能力，感染受体细胞后，通过DNA整合进宿主染色体而形成稳定的局限转导子。 低频转导 低频转导 裂解物 正常噬菌体 极少量的部分 缺陷噬菌体 （局限转导噬菌体） 转导颗粒 局限转导子 （极少量） 低感染复数 高频转导 低频转导 裂解物 正常噬菌体 极少量