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分子生物学技术服务 常用的病毒载体的特点 腺病毒（Adenovirus，AdV）是一种在自然界分布极为广泛的DNA病毒。 腺病毒没有囊膜，20面体对称，直径70-80nm。线状的双链DNA包裹在由252个壳粒组成的衣壳中。20面体的12个顶角各有一个称为五邻体的顶角壳粒，由两个构件拼成，一个是基底部，另一个是纤突。纤突顶端呈球形，与受体结合。240个非顶角壳粒，称为六邻体。 病毒颗粒中的蛋白至少有15种。 40%成年人有Ad5中和抗体。 腺病毒的基因组结构、主要编码蛋白及功能 E1 早期激活蛋白 E2 病毒DNA复制 E3 逃避宿主抗病毒免疫反应 E4 转录控制，DNA复制 L1~5 病毒结构蛋白：外壳蛋白、六邻体、五邻体和纤突 腺病毒载体的主要特点 对腺病毒基因组的结构和功能研究得比较清楚，为构建腺病毒载体打下了基础。 腺病毒感染的宿主细胞范围广，感染效率高，不仅可以感染正在分化的细胞，也可以感染静止及非分裂的细胞。 腺病毒理化性质稳定，4℃：3-4个月。-80℃：数年。冻干后不需冷藏。滴度：1010-1012pfu/ml 。 包装容量较大，E1缺失：7.5kb。E1+E3缺失：8.3kb。Gutless Ad：35kb。 不整合，附加体形式存在，遗传毒性小。 致病性低。呼吸道、消化道均可增殖。选择口服，滴鼻喷雾、腹腔给药、肌肉注射等诸多给药途径。 35型腺病毒(Ad35)概述 Ad35属于B亚属，B亚属又依据组织亲嗜性和与致病部位的相关性进一步分为B1和B2两组：B1组主要感染呼吸道，B2组主要感染肾和尿道。Ad11p,Ad14,Ad35为B2组腺病毒；Ad3,Ad16,Ad21，Ad50为B1组腺病毒。 研究表明，Ad35的主要细胞受体是CD46。CD46是一种广泛表达的补体调节蛋白，这种蛋白几乎在所有的人类体细胞表面都存在，因而Ad35有着相当广泛的嗜性。 研究表明，由B组腺病毒发展而来的基因转移载体可以较好地转导造血细胞、造血干细胞、树突状细胞（DC细胞）和恶性肿瘤细胞等靶细胞，而这些细胞往往不易被常用的腺病毒载体（如Ad5）感染。 腺病毒相关病毒是一种单链DNA病毒,因其常存在腺病毒制备物中而得此名。属细小病毒科，无包膜，二十面体，直径20~30nm。 AAV是一种复制依赖型病毒，需要在辅助病毒（通常为腺病毒Ad或单纯疱疹病毒HSV-1）存在的情况下才能进行复制并产生子代病毒。 AAV病毒作为基因治疗载体的优缺点 优点：1. 无致病性 2. 能感染众多组织 3. 免疫原性较弱 4. 可潜伏感染，表达时间较长。 缺点：1. 只能携带不大于5kb的外源基因 2. 表达水平较低，有效转导需要较高滴度的病毒 3. 生产系统较为复杂 4. 整合特性有可能引起突变 9.2kb基因组，单链RNA（×2） 有包膜，表面有结合细胞的糖蛋白 病毒直径80~100nm 病毒粒子含反转录酶和整合酶 HIV Genome 慢病毒载体的优越性 基于HIV的慢病毒载体（Lentiviral Vector）能有效地感染分裂细胞和非分裂细胞，比传统的逆转录病毒载体应用范围广。 能高效地将目的基因转导入体内和体外培养的细胞中去。 能够稳定地长期地表达目的基因，优于腺腺病毒载体。 由于更换了膜蛋白（VSVG），宿主范围相当广泛。 通过合理设计极大的加强了其安全性，没有产生复制型慢病毒的可能性，安全性考虑来自其整合特性。 SNP = Single Nucleotide Polymorphism 基因组水平上由单个核苷酸（A，G，C，T）的变异所引起的DNA序列多态性，这种变异可由单个碱基的转换（transition）或颠换（transversion）引起，也可由碱基的插入/缺失（InDel）所致，狭义的SNP 定义并不包括后两种情况。 SNP的生物学意义 在编码区或剪切区改变氨基酸序列，造成蛋白序列变化。 在调控区改变基因表达量，造成蛋白量的变化。 不直接引起蛋白的变化，但作为一种分子标记，辅助寻找致病基因。 应用范围 人类基因组 医学：疾病基因定位、发病风险评估、个体化诊断与医疗 药物基因组学：研究遗传变异对用药反应的影响 群体遗传学：进化、人群迁徙、分类 法医：个体识别 动植物基因组 农业研究：优良性状基因定位、良种筛选 群体遗传学：进化、分类 微生物基因组 镰刀状细胞贫血 理想的SNP检测方法 灵敏、准确（反应原理严谨）； 快速、简便、高通量，适合自动化操作（操作和分析的自动化程度高）； 费用相对低廉，试