核酸化学3-RNA的结构和特性.pptVIP

复旦大学生物化学系 黄伟达 RNA结构与特性Structure and Characters of RNAs 1. RNA分子在糖基上比DNA分子多一个-OH基，位于2’位。A260nm/A280nm= 2.0, 而DNA为1.8。RNA分子遇碱极易降解，而DNA则不。 2. RNA分子一般为单链分子，因此容易形成自由能为最小的独特的二级结构, 其双链部分符合Watson-Click双螺旋模型。 3. 正因为独特的二级结构和2’羟基的存在, 一些 RNA分子具有自我切断、自我连接，或切断其他核酸分子、连接其他核酸分子的酶学活性，第一个可以自我复制的分子被认为是RNA分子。 4. RNA分子的组成成分可以通过由酶 (Ribonucleotide diphosphate reductase)催化的反应转化为DNA分子的组成成分 。 5. RNA分子在细胞中同时扮演着信息的媒介作用和执行者的作用，mRNA为前者，rRNA、tRNA和snRNA为后者。因此有人很自然的认为，生命的早期可以称为RNA world。 6. RNA比DNA分子更容易受到修饰，均有其作用， 如mRNA的5’帽子能启动蛋白质的翻译，tRNA上的修饰可以增加tRNA的寿命。 7. 真核基因拥有令人吃惊的特点，顺序中插入了很多不编码氨基酸的“废物”（Introvening sequence, 或叫内含子，intron），这些序列在转录后的mRNA成熟之前被除去。 RNA的功能 1. 遗传密码的中间担体(mRNA) 2. mRNA剪接等加工的活性成份(snRNA，small nuclear RNA) 3. 核糖体的骨架结构及与mRNA的识别(rRNA) 4. 活化氨基酸的担体(tRNA) *5. 酶的活性成份 *6. 病毒基因组的担体 Crick的中心法则 细胞中的RNA mRNA 1. 原核生物mRNA结构的特点： （1）多顺反子； （2） mRNA 5′端无帽子结构，3′端无多聚A尾； （3） mRNA一般没有修饰碱基。 2. 真核生物mRNA结构的特点： （1） 5′端有帽子结构； （2） 大多3′端有多聚A（polyA）尾； （3）分子中可能有修饰碱基：主要有甲基化； （4）分子中有编码区与非编码区。 原核生物的基因结构 模板链与非模板链 真核生物的基因结构 真核基因mRNA的形成 mRNA前体剪接机制 mRNA拼接反应需要有核内小分子RNA参与（snRNA），它们与蛋白质形成的复合物称为小核糖核蛋白颗粒，SnRNA分别被命名为U1、U2、U3、U4、U5和U6 RNA。SnRNA中的U2 RNA由与内源右端拼接部位附近的UACUAA顺序高度互补，形成一个环状结构，由特定的酶来识别切除该环状结构，完成拼接过程。 鸡卵清蛋白mRNA与它的基因杂交，intron存在的直观证据 真核生物mRNA的5’端和3’端 snRNA Small nuclear RNA 核内存在 是真核生物转录后加工过程中RNA剪接体（spilceosome）的主要成分，参与mRNA前体的加工过程。snRNA长度在哺乳动物中约为100-215个核苷酸。snRNA一直存在于细胞核中，与40种左右的核内蛋白质共同组成RNA剪接体，在RNA转录后加工中起重要作用。 胞质中的小RNA为scRNA。 snRNA参与内含子的剪接 rRNA 核糖体RNA 原核生物：5S、16S、23S 真核生物：5S、5.8S、18S、28S。 真核生物核糖体的60S亚基（大亚基）由5S、5.8S及28S rRNA与蛋白质形成；40S亚基（小亚基）由18S rRNA与蛋白质组成。 原核生物核糖体的50S亚基（大亚基）由5S及23S rRNA和蛋白质组成；30S亚基（小亚基）由16S rRNA与蛋白质组成。 核糖体，蛋白质和核酸的复合体 30S 亚基的三维结构 16 S rRNA序列在细菌分类鉴定中的作用 细菌16 S rRNA以其在进化上的特征性序列，已被广泛用于细菌分类和鉴定的分子指标。通过比较各类生物16 S rRNA的基因序列，从序列差异计算它们之间的进化距离，可以绘出生物进化树。因此，16 S rRNA序列分析技术的基本原理就是从微生物样本中16 S rRNA的基因片段，通过克隆、测序或酶切、探针杂交获得16 S rRNA序列信息，再与16 S rRNA数据库中的序列数据或其他数据进行比较，确定其在进化树中位置，从而鉴定样本中可能存在的微生物种类。 tRNA 1. 单链小分子； 2. 含有稀有碱基或修饰碱基； 3. 5’端总是磷酸化， 5’末端往往是pG； 4. 3’端是CpCpAOH序列； 5. 三叶草结构； 6. 三级结构是倒L型。 tRNA与氨基酸的连接 真核生物蛋白质合