生物信息的传递上转录.pptVIP

1957年 Crick提出了中心法测(central dogma) DNA → RNA→ 蛋白质 1970 Crick又作了部分修改： DNA RNA 蛋白质 确定有义链 1963 J.Marmur和Doty Spiegelnan区分有义链。采用枯草杆菌的SP8噬菌体为材料， 现在将作为转录模板的DNA单链称为模板链或反义链（antisen strand）， 非模板链称为有义链（sense strand）或编码链。 在体外DNA的两条链都可作为RNA合成的模板。 一、依赖DNA的RNA聚合酶（DDRP) ? 以DNA为模板，转录的方式是不对称的。 ? RNA链的延长方向是5’→3’的连续合成。 ? 需要Mg2+或Mn2+离子。 ? 缺乏外切酶活性，所以没有校正功能。 ? 不需要引物。 1、原核生物RNA聚合酶 全酶由六个亚基组成，去掉δ亚基的部分称为核 心酶（α2ββ/ ω ） 亚单位 分子量 亚单位数 功能 α 36512 2 决定哪种基因被转录 Β 150618 1 与转录全过程有关 β/ 155613 1 结合DNA模板 Ω 11000 δ 70263 1 辨认起始点 全酶由六个亚基组成，去掉σ亚基的部分称为核心酶（α2ββ/ ω ） 核心酶作用：链的延伸 σ因子：提高RNA聚合酶对启动子区DNA序列的亲和力。辨认起始点，负责模板链的选择和转录的起始。 全酶：启动子的选择和转录的起始 2、真核生物RNA聚合酶 ? RNA聚合酶Ⅰ：核仁中，转录rRNA。 ? RNA聚合酶Ⅱ：核质中，转录hnRNA ? RNA聚合酶Ⅲ：核质中，转录tRNA和小核RNAs。 ? 线粒体RNA聚合酶 二、RNA的转录过程 转录可分为识别、起始、延长和终止三个阶段。 （一）识别：即RNA聚合酶全酶识别启动子 启动子：是一段位于5’端上游区的DNA序列，能活化RNA聚合酶，使之与模板DNA准确结合并启动转录功能的特殊序列。 转录单元：是一段从启动子开始至终止子结束的DNA序列。（可以是一个基因，也可以是几个基因） 1. -10序列： -10序列是由Pribnow和Schaller（1975）发现，故也称为Pribnow框盒（Pribnow box）。 保守序列为T80A95T45A60A50T9 位于-10bp左右，A.T较丰富，易于解链。其功能是: (1) RNA pol紧密结合; (2) 形成开放启动复合体； (3) 使RNA pol定向转录。 -10序列对转录的效率影响 TATAAT→AATAAT，转录效率下降,称为下降突变（down mutation）。 TATGTT→TATATT，转录效率上升，为上升突变（up mutation）。 2. -35序列 -35序列又称为Sextama盒（Sextama box）， 其保守序列为（T82T84G78A65C54A45） 其功能是: (1) 为RNA pol的识别位点。 σ亚基识别-35序列，为转录选择模板 (2)-35和-10序列的距离是稳定的，此与RNA pol的结构有关。 3. 转录起始位点（I）。 转录开始时模板上的第一个碱基 在原核中常为A或G 而且位置固定 （二）转录起始和延伸 起始过程： RNA聚合全酶识别启动子，可逆性结合形成封闭复合物。伴随着DNA构象的变化，封闭复合物转变为开放复合物，聚合酶全酶所结合的DNA序列中有一段双链被解开。开放复合物与最初的两个NTP相结合并在这两个核苷酸之间形成磷酸二酯键，形成RNA聚合酶、DNA和新生RNA的三元复合物。 1、原核生物转录起始 ? σ亚基识别转录起始位点，全酶就与启动子的-35区-10区序列结合形成启动子复合物。合成6-9bp时σ因子从全酶解离下来再与另一个核心酶结合成全酶反复利用。 转录的起始 1.全酶与模板的DNA接触，生成非专 一的,不稳定的复合物在模板上移动； 2. 起始识别：全酶与－35序列结合， 产生封闭的酶-启动子二元复合物 （closed binary complex）； 3.全酶紧密地结合在-10序列处，模板 DNA局部变性，形成开放的启动子二 元复合体； 4. 酶移动到I，第一个rNTP转录开始,σ 因子释放,形成酶-启动子-rNTP三元复 合体（ternary complex）。 2、真核生物转录起始 需要多