生物二轮第一讲基因工程和细胞工程.pptVIP

例1 英国科学家维尔莫特首次用羊的体细胞（乳腺细胞）成功地培育出一只小母羊，取名为“多利”，这一方法被称为“克隆”，以下四项中与此方法在本质上最相近的是 （ ） A.将兔的早期胚胎分割后，分别植入两只母兔子宫 内，并最终发育成两只一样的兔 B.将人的抗病毒基因嫁接到烟草的DNA分子上，培 育出具有抗病能力的烟草新品种 C.将鼠骨髓瘤细胞与经过免疫的腺细胞融合成杂交 瘤细胞 D.将人的精子与卵细胞在体外受精，待受精卵在试管内发育到囊胚期时，再植入女性子宫内发育成“试管婴儿” 解析 “克隆”是采用细胞核移植技术，属于无性生殖。将兔的早期胚胎分割后，分别植入两只母兔子宫内，并最终发育成两只一样的兔属于胚胎分割移植，属无性生殖。将人的抗病毒基因嫁接到烟草的DNA分子上，培育出具有抗病能力的烟草新品种，这属于基因工程技术。“试管婴儿”是胚胎移植技术，属于有性生殖。 答案 A 方法点拨 做好本题的关键是要准确区分胚胎移植、胚胎分割移植和细胞核移植技术。 例2 如图为某种质粒表达载体简图，小箭头所指分别为限制性EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位点， ampR为青霉素抗性基因，terR为四环素 抗性基因，P为启动子，T为终止子，ori 为复制原点。已知目的基因的两端分别有 包括EcoRⅠ、BamHⅠ在内的多种酶的酶切位点。 据图回答下列问题： （1）将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用EcoRⅠ酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有 、 、 三种。若要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行 。 （2）用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接物是 ；若接种到含青霉素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是 。 （3）目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是 ，其合成的产物是 。 （4）在上述实验中，为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是 。 解析 （1）用EcoRⅠ酶切出的目的基因和质粒具有相同的黏性末端，如果放在一起加入DNA连接酶，则可出现三种连接结果，即会出现目的基因自身形成的连接物，载体自身形成的连接物和重组质粒，要通过筛选、纯化才能选出符合要求的DNA。（2）载体自身形成的连接物能重新形成完整的tetR基因，具有抗四环素的特点，其他连接物中tetR基因被限制酶破坏，不再具有抗四环素的特点；在整个操作过程中，ampR基因保持完整，质粒自身形成的连接物和重组质粒都具有抗青霉素的特性。（3）RNA聚合酶与相关基因的启动子结合，完成的是转录过程。（4）将含有目的基因的靶DNA片段和载体分别用两个不同的 限制酶切割，使两种DNA片段自身的5′和3′黏性末端不同，但二者相同末端又互补，这明显减少靶DNA片段和载体自身环化与串连，使外源DNA片段能正确插入载体启动子下游。在本题中目的基因两端有EcoRⅠ酶切点和Bam HⅠ酶切点，在质粒载体上也有这两种酶的切点，所以可以用这两种酶切出非同源性互补末端来阻止其他连接。 答案 （1）目的基因—载体连接物 载体—载体连接物 目的基因—目的基因连接物 分离纯化 （2）载体—载体连接物 目的基因—载体连接物、载体—载体连接物 （3）启动子 mRNA （4）Eco RⅠ和Bam HⅠ 错因分析 由于对基因工程工具酶的应用理解不到位，特别是两种工具酶与获取目的基因和表达载体之间的联系与拓展掌握不好，造成错误。 第（1）小题中，由于含有目的基因的DNA片段和质粒上均含有EcoRⅠ酶的切割位点，所以用此酶切割后产生相同的黏性末端。这样，具有相同的黏性末端的片段用DNA连接酶均可连接，从而产生3类连接产物，这是教材知识的一种拓展，也是最易出错的地方。 1.（09·浙江理综）下列关于基因工程的叙述，错误的是 ( ) A.目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物 B.限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两类常用的工 具酶 C.人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无 生物活性 D.载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞 和促进目的基因的表达 解析 基因工程中目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物；常用的工具酶是限制性核酸内切酶和DNA连接酶；人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性，只有经过一定的物