现代分子生物学-06DNA重组.pptVIP

如果两个插入序列正好位于抗性基因两侧，该转座单位携带的性状对宿主细胞是有利的，因而具有选择优势。组合转座子的两个插入序列以正向或反向(更常见)位于两端，它们的序列可以不完全相同，有时只有一个插入序列具有转座活性，另一个已在多次传代中失去活性。组合转座子的结构如下： 3转座过程与效应 转座酶能够识别转座子的末端反向重复序列并且在其3′端切开，同时在靶部位交错切开单链，它的5′突出末端与转座子的3′末端连接，形成Shapiro中间体。不同种类转座子形成与靶序列连接中间体的过程大致相同；随后步骤各不一样。按其转座过程是否发生复制，可分为非复制转座(nonreplicative transposition) 和复制转座(replicative transposition)两类。非复制转座又称为保留性转座(conservative transposition)，转座子从原来位置上切除下来转入新的位置，其两条链均被保留。复制转座则在形成靶部位与转座子连接中间体后即进行复制。通过复制使原来位置与新的靶部位各有一个转座子，其一条链是原有的，另一条链是新合成的。复制转座使给体与受体分子连在一起，成为共整合体(cointegrate)，因此下一步必须通过重组将二者拆开。非复制转座与复制转座过程见图4-10。 图4-10非复制转座与复制转座的基本过程 所有转座因子都有在基因组中增加其拷贝数的能力。此过程可以借助两种方式来完成：一是通过转座过程的复制(复制转座)；另一是从染色体已完成复制的部位转到尚未复制的部位，然后随着染色体而复制。非复制转座的转座因子只能借后一种方式来扩增。共整合体含有两个拷贝的转座子，故可通过同源重组将连接的两部分分开。但是借助Rec A 蛋白拆分效率较低。转座子编码的解离酶可在解离区(res)进行重组，可极大提高解离效率。解离酶是一种重组酶，它所催化DNA链的断开和再连接并不需要供给能量。当它在res位点断开两条链时，解离酶以共价键连在键的5′末端。 转座因子首先因其可导致突变而被认识。它插入基因后，使基因突变失活，这是转座作用最直接的效应。当转座因子自发插入 细菌的操纵子时，即可阻止它所在基因的转录和翻译；并且由于转座因子带有终止子，它的插入将影响到操纵子中其后基因的表达，因而表现出极性(polarity)，也即方向性。由此构成的负突变只有在插入因子被切除后才能恢复。转座因子的存在，往往会引起宿主染色体DNA重组，造成染色体断裂、重复、缺失、倒位及易位等，是基因突变和重排的重要原因。转座因子也可通过干扰宿主基因与其调控元件之间的关系或转座因子本身的作用而影响邻近基因的表达，从而改变宿主的表型。 (二) 真核生物的转座因子 最早发现能转移的遗传因子是玉米转座子，它对染色体基因有不稳定的诱变效应，因而影响某些遗传性状，故称为控制因子。其后发现真核生物广泛存在各种转座因子。真核生物的转座因子与原核生物转座因子十分相似；转座依赖于转座酶，转座因子的两端有被转座酶识别 的反向重复序列，转座的靶位点是随机的，靶位点交错切开，插入转座因子后经修复形成两侧正向重复序列。但是二者在结构和性质上也有一些差别。原核生物的转录和翻译几乎是同时进行的，真核生物由于核结构的存在而使此两过程在空间上和时间都被分隔开了。因此，真核生物细胞内只要存在转座酶，任何序列片段具有该酶识别的反向重复末端均可发生转移， 而无需由被转移序列自身编码这些酶。这就可以说明，为什么真核生物的转座因子家族中只保留少数拷贝具有编码转座酶基因的活性，而多数拷贝中发生程度不同的删除，失去转座酶基因活性，但保留了两端的反向重复序列。原核生物的转座酶主要作用于产生它的转座因子，表现出顺式显性(cis dominance)，真核生物则无此特性，这也是二者最明显的差别。 ? END * 　接合作用。供体细胞被定义为雄性，受体细胞为雌性。通过接合而转移DNA的能力是由接合质粒(conjugative plasmid)提供的，与接合功能有关的蛋白质均由接合质粒所编码。能够促使染色体基因转移的接合质粒称为致育因子(fertility facter)，简称为性因子或F因子。大肠杆菌F质粒(F因子)是研究得最多，也是研究得最清楚的一种接合质 　粒。F质粒是双链闭环的大质粒，总长约100 kb，复制起点为oriV。F质粒可以在细胞内游离存在，也可以整合到宿主染色体内，因此属于附加体(episome)。其与转移有关的基因(tra)占据质粒的三分之一(～33 kb)，称为转移区，包括编码F性菌毛(F pilus)、稳定接合配对、转移的起始和调节等，总共约40个基因。 　2细菌的遗传转化 　　遗传转化(genetic transfo