第十二章现代生物技术与家畜育种.pptVIP

ed 三、动物育种中的现代生物技术 第二节 转基因动物技术 一、转基因动物的概念 转基因动物技术是将外源DNA导入性细胞或胚胎细胞并生产出带有外源DNA片段动物的一种技术。 二、转基因动物技术的一般步骤 生产转基因动物的步骤包括： (1) 选择能有效表达的蛋白质； (2) 克隆与分离编码这些蛋白质的基因； (3) 选择能与所需组织特异性表达方式相适应的基因调节序列； (4) 把调节序列与结构基因重组拼接，并在培养细胞或小鼠中预先检验其表达情况； (5) 把拼接的基因引入到受精卵的细胞核中； (6) 把引入后的受精卵移植到子宫，完成胚胎发育； (7) 检测幼畜是否整合外源基因、外源基因的表达情况以及外源基因在其后代中的传递情况。部分后代细胞携带有转入的外源基因，利用这些动物培育新的品系。 三、导入基因的方法 (一) 显微注射法 (二) 精子载体法 (三) 胚胎干细胞(ES)介导法 (四) 染色体片段显微注入法 (一)  显 微 注 射 法 人们已利用显微注射法将胸苷激酶基因、生长激素基因和鼠myc基因转入了哺乳动物细胞。这种方法不仅可以获得转基因动物所用的转基因动物细胞，而且也可以通过哺乳动物细胞来生产有用的蛋白质。(目前认为胃癌、乳腺癌、结肠癌、宫颈癌、何杰金氏病及头部肿瘤等都有myc基因的扩增或过度表达) 小鼠和兔的受精卵原核在普通显微镜下容易看到，而绵羊，尤其是猪和牛的卵细胞质稠密，不能看到原核。Hammer等用干涉相差显微镜可观察到80％的绵羊卵核，而猪和牛的卵子需经离心处理再用干涉相差显微镜才能观察到卵原核，离心处理后的多数受精卵仍能正常发育。 (二) 精子载体法 方法：将成熟的精子与带有外源DNA的载体进行共培育之后,使精子有能力携带外源DNA进入卵中，使之受精，并使外源DNA整合于染色体中。 Bracet等(1971)将家兔精液和放射性标记的SV40病毒DNA孵育后，在精子头部能够检测到放射活性，病毒DNA在受精过程中被带入了卵细胞。 Lavitravo等(1989)把质粒与小鼠的附睾精子共孵育30min，进行体外授精和移植，结果获得250个后代中，30％的为阳性，部分小鼠表达了CAT基因并传到F1代。这一方法在转基因鼠上的应用使人们看到转基因动物效率提高的希望。 影响DNA与精子结合的因素可能是获得成功的关键性因素，首先哺乳动物精子吸附外源DNA需特定的时期；其次精子吸附DNA时精子活性及DNA性质都受影响。 利用精子作为基因转移的工具，在实践中存在许多问题，但此技术至少在构思上对于大动物转基因研究具重要意义。 (三) ES细胞介导的转基因动物生产 胚胎干细胞(embryonic stem cell)是指当受精卵分裂发育成囊胚时内细胞团的细胞，它具有体外培养无限增殖、自我更新和多向分化的特性。无论在体外还是体内环境，ES细胞都能被诱导分化为机体几乎所有的细胞类型。胚胎干细胞注入寄主胚泡后，参与胚胎形成，进入嵌合体动物的生殖系统。 用DNA转染法或反转录病毒介导法可将基因导入胚胎干细胞，选出带有目的基因的细胞克隆，然后导入受体胚胎。由此法生成的后代都是嵌合体，若由这些嵌合体胚胎中再分离出干细胞，用核移植技术将其细胞核植入无核卵细胞，这样可以提高转基因的效率。 生物学中嵌合体是指同一个体中不同基因型的组织相互接触而存在的现象。 （四）染色体片段显微注入法 染色体介导法是指从人或动物染色体上割取特定的染色体片段(M期)或分离出来之后，以其为媒介将外源基因注入动物早期胚胎中，以获得外源DNA的动物，严格地讲称为转染色体动物。通常人们采用离心分离法或流式细胞仪(fow cytometry)分离法分离染色体。 尽管目前该技术应用困难较大，且成功率很低(0～0.002％)，但由于它具有不需经基因重组就可转移超大型外源DNA(大于1000kb)之独特优点，适于多基因转移。鉴于本法导入的遗传信息片段长，能生产出具备某些特殊疾病的实验动物模型。 四、基因的选择与转基因动物的研究现状 1. 转入基因的选择 目前在动物转基因的选择上主要包括四大类： (1) 与机体代谢调节有关的蛋白基因，这类基因参 与机体组织生长发育的调节，如生长激素基因等； (2) 抗性基因；抗逆、抗病等； (3) 经济性状的主效基因，如猪和绵羊的高繁殖力基因、肉牛的“双肌”基因等，这些基因与动物的生产力密切相关； (4) 治疗人类疾病所需的蛋白质基因，以拓宽动物的经济用途。 提高动物生长、生产性能的研究 美国伊利诺斯大学研究出一种带牛生长激素的转基因猪，这种猪生长快,体大,饲料利用率高，可给养猪业带来