Biozo与l-RNA.pptVIP

用BIOZOL试剂小量提取植物总RNA;实 验 目 的;实 验 原 理; BIOZOL 试剂是总 RNA 提取试剂 , 可直接用于人类、动物、植物、细菌等细胞或组织中的总 RNA 提取。样本在 BIOZOL 中充分裂解后加入氯仿离心 , 形成上清层、中间层和有机层 , 然后通过收集水样层 , 用异丙醇沉淀来得到 RNA 。????BIOZOL 试剂操作简便易行 , 可以同时处理多个样品 , 得到高质量的 RNA 。纯化的 RNA 可以直接用于 RNA 印迹分析、斑点杂交、 poly(A)+ 选择、体外翻译、 RNA 酶保护分析 RT-PCR 分析、构建 cDNA 文库等 RNA 研究。 ;实 验 步 骤;裂解???样品在这一步骤充分裂解，释放出RNA,DNA, 蛋白 分离???根据RNA,DNA,蛋白的特点，利用试剂将RNA,DNA，蛋白分离开，RNA在上清层 沉淀???利用核酸不溶解于醇类物质，进一步分离出RNA,让 RNA 沉淀出来 洗涤???将沉淀出来的RNA，洗涤，去除盐类杂质 溶解???在阴凉处???度干燥RNA沉淀,溶解，待用 ;⊕裂解 ⑴动/植物组织: 在液氮条件下将样品研磨成粉末，匀浆时组织样品量按照建议用量;每50-100mg 材料加1mlBIOZOL试剂。 ⑵单层贴壁生长的细胞: 吸尽培养液,在直径3.5 cm 的培养板中加入1mlBIOZOL,放置5～10 分钟,在放置过程中,晃动2～3 次,保证细胞裂解完全,将细胞裂解物移至离心管中。一般每20～30 cm2 加1 ml BIOZOL,细胞量为5×106-1×107个; ⑶悬浮生长的细胞:通过离心来沉淀细胞。在BIOZOL 试剂中用移液器反复吹打来裂解细胞。BIOZOL 按前言中建议的用量。在加入BIOZOL 前应避免洗涤细胞而增加mRNA 降解的可能性。破裂某些真菌和细菌可能需要使用匀浆器;样本加入BIOZOL 后,如不立即进行后续提取步骤,可保存于 -70℃冰箱1 个月。将匀浆样品在室温下孵育15 分钟,使样品充分裂解至匀浆液较透明且无颗粒。 可选步骤 Ⅰ：将匀浆液4℃,12,000g 离心5 min,取上清弃沉淀,继续下面步骤；;;;;图1：小鼠肝 组织 图2：新鲜的 水稻叶片 图3：单层培养 A431 细胞